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原文传递用于检测突触囊泡蛋白SV2A的单分子检测方法及试剂盒

专利名称：	用于检测突触囊泡蛋白SV2A的单分子检测方法及试剂盒
摘要：	本发明涉及单分子检测方法在检测突触囊泡蛋白SV2A的浓度中的应用，并涉及检测突触囊泡蛋白SV2A浓度的基于计数的单分子检测方法及试剂盒。本发明首次将基于计数的单分子检测方法用于SV2A浓度的检测中，本发明的方法通过普通荧光显微镜即可实现，对设备的要求低，并且检测下限低（灵敏度高），检测动态范围宽，且CV值低。
专利类型：	发明专利
申请人：	首都医科大学宣武医院;苏州宇测生物科技有限公司
发明人：	王培昌;王小灵;官志超;安源
专利状态：	有效
申请日期：	2023-08-15T00:00:00+0800
发布日期：	2023-11-10T00:00:00+0800
申请号：	CN202311023730.9
公开号：	CN117031040A
代理机构：	北京格汇专利代理事务所(特殊普通合伙)
代理人：	张伟洋
分类号：	G01N33/68;G01N33/543;G01N33/544;G01N33/552;G01N33/58;G;G01;G01N;G01N33;G01N33/68;G01N33/543;G01N33/544;G01N33/552;G01N33/58
申请人地址：	100032 北京市西城区长椿街45号;
主权项：	1.检测突触囊泡蛋白SV2A浓度的基于计数的单分子检测方法，其包括以下步骤：（1）将能够与突触囊泡蛋白SV2A结合的捕获抗体固定到磁珠上，加入含有突触囊泡蛋白SV2A的样品，使突触囊泡蛋白SV2A的第一位点与捕获抗体结合，从而捕获样品中的突触囊泡蛋白SV2A；（2）加入能够与突触囊泡蛋白SV2A的第二位点结合的检测抗体，使检测抗体与突触囊泡蛋白SV2A的第二位点结合，然后加入能够直接或间接与检测抗体结合的原位信号增强粒子；或者先将检测抗体与原位信号增强粒子结合而形成复合物，再将该复合物加入；所述原位信号增强粒子的粒径为180nm~350nm，且含有荧光材料及载体，（3）用光学成像设备将所述原位信号增强粒子发出的荧光信号成像；（4）对原位信号增强粒子的个数进行统计，进一步计算得到样品中突触囊泡蛋白SV2A的浓度，其中，步骤（1）和（2）可以分别替换为下述的步骤（1’）和（2’），（1’）将检测抗体与样品混合，使其与样品中的突触囊泡蛋白SV2A的第二位点结合，然后加入能够直接或间接与检测抗体结合的原位信号增强粒子；或者先使原位信号增强粒子与检测抗体结合而形成复合材料，再将该复合材料加入样品中，使该复合材料与样品中的突触囊泡蛋白SV2A的第二位点结合；其中，所述原位信号增强粒子与所述步骤（1）中的原位信号增强粒子相同；（2’）将能够与突触囊泡蛋白SV2A结合的捕获抗体固定至磁珠上，然后加入至步骤（1’）的体系中，使所述捕获抗体与所述突触囊泡蛋白SV2A的第一位点结合，从而将突触囊泡蛋白SV2A捕获。 2.如权利要求1所述的单分子检测方法，其中，所述原位信号增强粒子的粒径为200~300nm，粒径的变异系数（CV值）为1%~10%。 3.如权利要求1或2所述的单分子检测方法，其中，所述载体为聚乙二醇、苯乙烯-（甲基）丙烯酸共聚物、二氧化硅、聚苯乙烯、或聚丙烯酰胺，所述荧光材料为荧光染料、量子点、聚集诱导发光材料或半导体共轭聚合物荧光材料。 4.如权利要求1或2所述的单分子检测方法，其中，步骤（1）和步骤（2’）中的突触囊泡蛋白SV2A的第一位点与捕获抗体的结合在pH8~10的范围内进行。 5.权利要求1~4中任一项所述的单分子检测方法在检测突触囊泡蛋白SV2A的浓度中的应用。 6.用于检测突触囊泡蛋白SV2A的基于单分子计数的试剂盒，其包含原位信号增强粒子和磁珠，所述原位信号增强粒子包含荧光材料和载体，且平均粒径为180~350nm，粒径的变异系数（CV值）为1%~10%。 7.如权利要求6所述的试剂盒，其中，所述载体为聚乙二醇、苯乙烯-（甲基）丙烯酸共聚物、二氧化硅、聚苯乙烯、或聚丙烯酰胺，所述荧光材料为荧光染料、量子点、聚集诱导发光材料或半导体共轭聚合物荧光材料。 8.如权利要求6或7所述的试剂盒，其还包含分别与突触囊泡蛋白SV2A的第一位点结合的捕获抗体和与突触囊泡蛋白SV2A结合的检测抗体。 9.如权利要求6或7所述的试剂盒，其还包含缓冲体系，所述缓冲体系的pH为8~10，能够使来自样品的突触囊泡蛋白SV2A的第一位点与捕获抗体的结合在pH8~10的范围内进行。 10.如权利要求6或7所述的试剂盒，其不含酶、化学发光试剂。