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原文传递一种能同时对大肠埃希氏菌进行鉴定和鞭毛分型的方法和应用

专利名称：	一种能同时对大肠埃希氏菌进行鉴定和鞭毛分型的方法和应用
摘要：	本发明属于细菌分型技术领域，具体涉及一种能同时对大肠埃希氏菌进行鉴定和鞭毛分型的方法和应用。该方法首先将待测菌株的单克隆菌落在水中分散，以含有胰酶的碳酸氢铵溶液消化后，用浸润过甲酸的过滤器进行过滤，向滤液中加入甲酸后，即可进行检测。该方法不存在传统血清学分型方法的各种弊端，且无需进行大量富集鞭毛以及在膜上酶解消化等操作，大幅缩短了检测时间。检测结果不仅能够用于在种的水平鉴定待测菌株，还能准确鉴定其鞭毛分型。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	河北;13
申请人：	张丽杰
发明人：	张丽杰;赵振军;左惠芬;冯忠军;黄印启;郑翠影;郝佳豪;叶佳情;宋明慧;金素丽;赵培;张亚光
专利状态：	有效
申请日期：	2023-08-04T00:00:00+0800
发布日期：	2023-11-14T00:00:00+0800
申请号：	CN202310978968.0
公开号：	CN117054546A
代理机构：	河北国维致远知识产权代理有限公司
代理人：	任青
分类号：	G01N30/02;G01N30/72;G01N30/06;G01N33/68;G;G01;G01N;G01N30;G01N33;G01N30/02;G01N30/72;G01N30/06;G01N33/68
申请人地址：	050000 河北省石家庄市桥西区振岗路118号以岭药业宿舍1-3-402
主权项：	1.一种能同时对大肠埃希氏菌进行鉴定和鞭毛分型的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤A、将待测菌株在培养基上培养，从培养物中挑取单克隆菌落，置于双蒸水中并充分分散，加入胰酶溶液，在35～39℃消化至少1h；所述胰酶溶液中含有80～120μg/mL胰酶和80～120mmol/L碳酸氢铵，所述胰酶溶液与所述双蒸水的体积比为0.8～1.2:1；步骤B、将步骤A所得消化液置于已被0.08～0.12％v/v甲酸水溶液润湿处理过的过滤器上，以10000～15000×g离心5～10min，收集滤液；步骤C、向步骤B所得滤液中加入2～2.5倍量0.08～0.12％v/v甲酸水溶液，混匀后进行检测，根据检测结果判断待测菌株的类型和鞭毛分型。 2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤A中所述培养基为羊血胰蛋白酶大豆琼脂培养基；和/或步骤A中所述胰酶溶液中所述碳酸氢铵的浓度为100mmol/L；和/或步骤A中所述胰酶溶液中所述胰酶的浓度为100μg/mL；和/或步骤A中所述消化的温度为37℃；和/或步骤A中所述胰酶溶液与所述双蒸水的体积比为1:1。 3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤B中所述甲酸水溶液的浓度为0.1％v/v；和/或步骤B中以10000×g离心10min。 4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤C中所述甲酸水溶液的体积为所述滤液体积的2倍；和/或步骤C中甲酸水溶液的浓度为0.1％v/v。 5.根据权利要求1～4任一项所述的方法，其特征在于，步骤C中所述检测的方法为液相色谱-串联质谱法。 6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述液相色谱-串联质谱法的色谱条件包括：色谱柱：C18色谱柱；流动相：流动相A为含有5％乙腈的0.1％v/v甲酸水溶液，流动相B为乙腈；进行梯度洗脱，洗脱程序为：0→55min，流动相B的体积由5％线性增加到35％；流速为300nL/min；柱温为25～40℃。 7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述液相色谱-串联质谱法的质谱条件包括：以数据依赖模式采集质谱数据：每个扫描周期为一次剖面离子扫描和5次产物离子扫描。 8.权利要求1～7任一项所述的能同时对大肠埃希氏菌进行鉴定和鞭毛分型的方法在鉴定细菌种属中的应用。 9.权利要求1～7任一项所述的能同时对大肠埃希氏菌进行鉴定和鞭毛分型的方法在大肠埃希氏菌鞭毛分型中的应用。
所属类别：	发明专利