详情

原文传递一种检测谷物中赭曲霉毒素A的开关开型电化学发光适配体传感器制备方法

专利名称：	一种检测谷物中赭曲霉毒素A的开关开型电化学发光适配体传感器制备方法
摘要：	本发明公开一种检测谷物中赭曲霉毒素A的开关开型电化学发光适配体传感器的制备与使用方法，其特征在于：将黑磷量子点和联吡啶钌通过静电作用结合在一个纳米粒子内以制备一种新型自增强发光体，利用多壁碳纳米管、聚乙烯亚胺和金以合成的复合纳米材料，黑磷量子点对联吡啶钌的强催化作用、自增强发光体提供的高初始电化学发光强度，适配体对赭曲霉毒素A的特异性识别，二茂铁对联吡啶钌发光信号的猝灭以及加入靶标后发光信号的恢复，构建了一个开关开型检测谷物中赭曲霉毒素A的电化学发光适配体传感器，具有较好的灵敏度、稳定性、重现性和较低的检测限，为其他真菌毒素和小分子物质的检测提供了一种通用的分析工具。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	山东;37
申请人：	山东理工大学
发明人：	赵文苹;桑茂盛;孟晓娅;李忠钰;周全龙;孙霞;郭业民
专利状态：	有效
申请日期：	2023-06-15T00:00:00+0800
发布日期：	2023-11-10T00:00:00+0800
申请号：	CN202310711469.5
公开号：	CN117030815A
分类号：	G01N27/327;G01N27/30;G01N21/76;G01N21/64;G01N33/569;G;G01;G01N;G01N27;G01N21;G01N33;G01N27/327;G01N27/30;G01N21/76;G01N21/64;G01N33/569
申请人地址：	255086 山东省淄博市高新技术开发区高创园A座313室
主权项：	1.一种检测谷物样品中赭曲霉毒素A的开关开型电化学发光适配体传感器，其特征在于：运用化学键结合、共价键、自组装等技术构建适配体传感器用于检测赭曲霉毒素A，引入多壁碳纳米管和金复合物、自增强发光体等复合材料，增强适配体传感器的电化学特性，提供高初始电化学发光信号，利用适配体与赭曲霉毒素A的特异性结合来定向检测赭曲霉毒素A，通过适配体来引入二茂铁来实现发光信号的猝灭，引入靶标物质后释放二茂铁导致发光信号的恢复，根据不同阶段传感器的发光强度来灵敏的检测目标物质。 2.根据权利要求1所述的一种检测谷物样品中赭曲霉毒素A的开关开型电化学发光适配体传感器，其特征在于：所述氨基修饰的适配体互补链序列为：5′-NH2-TGTCCGATGCTCCCTTTACGCCACCCACACCCGATC-3′；所述二茂铁修饰的适配体序列为：5′-Fc-GATCGGGTGTGGGTGGCGTAAAGGGAGCATCGG ACA-3′。 3.根据权利要求1所述的一种检测谷物样品中赭曲霉毒素A的开关开型电化学发光适配体传感器，其特征在于：多壁碳纳米管和金复合物、自增强发光体的制备步骤为： (1)AuNPs-PEI-MWCNTs的制备：往4mL PEI溶液加入2.0mg羧化MWCNTs，然后将混合物超声分散，然后将得到的混合物离心并再分散得到PEI-MWCNTs，随后，将1mL合成的AuNPs逐渐滴入1mL制备的PEI-MWCNTs中，然后在黑暗中搅拌过夜，离心后，将黑色固体重新分布在2mLpH为7.4的0.01M磷酸缓冲盐水中，成功合成了AuNPs-PEI-MWCNTs； (2)BPQDs的制备：将4mL N-甲基吡咯烷酮(NMP)和5mg黑磷粉在在100W的冰浴中超声8小时，得到的分散液以7000转/分的速度离心20分钟，随后以10000转/分的速度二次离心20分钟，每次收集含有溶液顶部75％的上清；(3)Ru@SiO2的制备：首先将7.08mL曲拉通溶液，30mL环己烷，7.2mL正己醇和1.36mL水搅拌5分钟，形成油包水反相微乳液，然后加入320μL0.1M的联吡啶钌溶液，搅拌30分钟至溶液透明，然后快速注入400μL正硅酸四乙酯和240μL氨水引发聚合，在黑暗的坏境中搅拌混合物24小时，用40mL丙酮分离最终产物，10000rpm离心10分钟，然后用乙醇和水的混合物洗涤三次，最后，Ru@SiO2在真空冷冻干燥机中干燥，并在4℃保存以备将来使用； (4)Ru@SiO2-BPQDs的制备：首先将10mg Ru@SiO2分散于5mL乙醇中，加入200μL氨丙基三乙氧基硅烷，搅拌4小时后，用乙醇和水的混合物洗涤，然后在真空冷冻干燥机中干燥得到Ru@SiO2-NH2，将170μL 10mg/ml Ru@SiO2-NH2和850μL 3mg/ml BPQDs加入到烧杯中，在黑暗中搅拌12小时，由于BPQDs与Ru@SiO2-NH2电荷相反，两者通过静电作用结合形成自增强发光体Ru@SiO2-BPQDs。 4.根据权利要求1所述的一种检测谷物样品中赭曲霉毒素A的开关开型电化学发光适配体传感器，其特征在于：以权利要求1-3任一项所述的电化学发光适配体传感器作为工作电极，饱和甘汞为参比电极，铂丝电极为对电极组成三电极体系，样品中的赭曲霉毒素A被定量捕捉到传感器的表面，通过产生的发光信号用于检测赭曲霉毒素A。 5.根据权利要求4所述的一种检测谷物样品中赭曲霉毒素A的开关开型电化学发光适配体传感器的应用，其特征在于，适配体传感器的制备步骤为：在处理好的玻碳电极(GCE)上滴加5μL 5mg/mL的AuNPs-PEI-MWCNTs并在室温下干燥得到AuNPs-PEI-MWCNTs/GCE，接着在电极上滴加5μL Ru@SiO2-BPQDs，于室温条件下，待电极自然晾干后得到Ru@SiO2-BPQDs/AuNPs-PEI-MWCNTs/GCE，在电极上滴加5μL 200nM的适配体互补链，于室温条件下放置一小时，待电极自然晾干后得到cDNA/Ru@SiO2-BPQDs/AuNPs-PEI-MWCNTs/GCE，之后在电极上滴加5μLBSA溶液，待电极自然晾干，再滴加5μL 200nM的适配体链，在室温条件下放置一小时后适配体传感器Apt-Fc/BSA/cDNA/Ru@SiO2-BPQDs/AuNPs-PEI-MWCNTs/GCE制备完成，保存在4℃条件下备用。
所属类别：	发明专利