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原文传递基于DNA行走机器人构建的电化学发光适体传感器检测赭曲霉毒素A的方法

专利名称：	基于DNA行走机器人构建的电化学发光适体传感器检测赭曲霉毒素A的方法
摘要：	本发明公开了一种基于DNA行走机器人构建的电化学发光适体传感器检测赭曲霉毒素A的方法，1)制备赭曲霉毒素A特异性响应的双链DNA(dsDNA)；2)制备dsDNA和DNA探针以及三(2‑羧乙基)膦盐酸盐的混合液；3)将上述DNA混合液滴加在CdSQDs/GCE表面，采用6‑巯基‑1‑己醇封闭电极表面非特异性的活性结合位点之后，制得电化学发光适体传感器；4)制备OTA和切刻内切酶的混合液，将混合液滴加到传感器表面，并利用电化学发光分析仪对反应体系进行检测；5)利用透射电子显微镜对CdSQDs进行表征。本发明不需要借助精密昂贵的实验仪器，没有严格复杂的实验操作过程，极大地降低了OTA的检测成本，具有灵敏度高、抗干扰能力强、制备简便且成本低廉的优点。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	江苏;32
申请人：	东南大学
发明人：	卫伟;王春蕾;刘松琴
专利状态：	有效
申请日期：	2019-01-11T00:00:00+0800
发布日期：	2019-05-28T00:00:00+0800
申请号：	CN201910025898.0
公开号：	CN109813703A
代理机构：	南京苏高专利商标事务所(普通合伙)
代理人：	柏尚春
分类号：	G01N21/76(2006.01);G;G01;G01N;G01N21
申请人地址：	210000 江苏省南京市江宁区东南大学路2号
主权项：	1.一种基于DNA行走机器人构建的电化学发光适体传感器检测赭曲霉毒素A的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤： 1)制备赭曲霉毒素A特异性响应的双链DNA即dsDNA； 2)制备dsDNA和DNA探针即Cy5-DNA以及三(2-羧乙基)膦盐酸盐的混合液； 3)将上述DNA混合液滴加在CdS QDs/GCE表面，采用6-巯基-1-己醇封闭电极表面非特异性的活性结合位点之后，制得电化学发光适体传感器； 4)制备OTA和切刻内切酶Nb.BbvCI的混合液，将混合液滴加到传感器表面，并利用电化学发光分析仪对反应体系进行检测； 5)利用透射电子显微镜对CdS QDs/GCE进行表征。 2.根据权利要求1所述的电化学发光适体传感器检测赭曲霉毒素A的方法，其特征在于，所述步骤1)赭曲霉毒素A特异性响应的双链DNA选取两条特定序列的单链DNA即aptamer和DNA walker，在DNA杂交缓冲溶液中95～100℃水浴5min后冷却至室温，形成杂交的dsDNA。 3.根据权利要求2所述的电化学发光适体传感器检测赭曲霉毒素A的方法，其特征在于，所述DNA杂交缓冲溶液为：10mM Tris-HCl，0.1M NaCl，pH 7.2～7.4。 4.根据权利要求1所述的电化学发光适体传感器检测赭曲霉毒素A的方法，其特征在于，所述步骤2)DNA探针选取一条特定序列的荧光染料修饰的单链DNA；制备dsDNA和DNA探针即Cy5-DNA以及三(2-羧乙基)膦盐酸盐的混合液具体步骤如下：取一小离心管，依次加入dsDNA溶液、Cy5-DNA溶液和三(2-羧乙基)膦盐酸盐溶液，随后加入超纯水使得混合液的最终体积为50μL，混合后并在4℃的条件下静置存放1～2h。 5.根据权利要求4所述的电化学发光适体传感器检测赭曲霉毒素A的方法，其特征在于，所述的dsDNA溶液和Cy5-DNA溶液的浓度分别为2μM～5μM和20μM～30μM。 6.根据权利要求1或4所述的电化学发光适体传感器检测赭曲霉毒素A的方法，其特征在于，所述混合液中Cy5-DNA与dsDNA的摩尔浓度比值为1～25：1。 7.根据权利要求1所述的电化学发光适体传感器检测赭曲霉毒素A的方法，其特征在于，所述步骤3)DNA混合液滴加在CdS QDs/GCE表面的具体步骤如下：取10μL混合液滴加到CdS QDs/GCE表面，4℃的条件下静置反应10～16h；采用的6-巯基-1-己醇的浓度为0.1mM～1mM，用量为5μL。 8.根据权利要求1所述的电化学发光适体传感器检测赭曲霉毒素A的方法，其特征在于，所述步骤3)中，硫化镉量子点修饰的玻碳电极CdS QDs/GCE的制备方法为：首先对玻碳电极进行预先处理，然后取5μL 5mg/mL的CdS QDs溶液滴加到干燥后的玻碳电极表面，在4℃的温度下静置干燥3h，得到CdS QDs/GCE。 9.根据权利要求1所述的电化学发光适体传感器检测赭曲霉毒素A的方法，其特征在于，所述步骤4)Nb.BbvCI的剂量为0～10U；OTA的浓度为0～6nM；混合液滴加到传感器表面的具体步骤如下：取10μL混合液滴加到传感器表面，37℃的条件下反应1.5～3.5h。 10.根据权利要求1所述的电化学发光适体传感器检测赭曲霉毒素A的方法，其特征在于，所述步骤5)透射电子显微镜对CdS QDs/GCE的表征的具体步骤如下：将10μL经过稀释100倍的CdS QDs溶液滴加到铜网上，室温下自然晾干之后，进行透射电子显微镜检测。
所属类别：	发明专利