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原文传递一种同时检测黄曲霉毒素B1和赭曲霉毒素A的比率电化学适配体传感器的制备方法

专利名称：	一种同时检测黄曲霉毒素B1和赭曲霉毒素A的比率电化学适配体传感器的制备方法
摘要：	本发明属于电化学传感技术领域，涉及一种用于同时检测AFB1和OTA的比率电化学适配体传感器的制备方法；传感器通过在金电极上顺序组装AQ‑hDNA、Fc‑Apt1和MB‑Apt2而制备，目标物与适配体的结合引起Fc‑Apt1和MB‑Apt2从电极表面剥离，导致比率信号IFc/IAQ和IMB/IAQ下降，实现分别量化和检测AFB1和OTA的目的；该传感器对AFB1的检测线性范围为10pg/mL‑3ng/mL，检出限为3.3pg/mL；对OTA的检测线性范围为30pg/mL‑10ng/mL，检出限为10.0pg/mL；同时检测2种物质，具有灵敏度高、选择性好、精准度高等特点。
专利类型：	发明专利
申请人：	江苏大学
发明人：	由天艳;朱成喜;刘东;李玉叶;申秀丽
专利状态：	有效
申请日期：	1900-01-20T15:00:00+0805
发布日期：	1900-01-20T19:00:00+0805
申请号：	CN202010040829.X
公开号：	CN111175364A
分类号：	G01N27/327;G01N27/38;G01N27/48;G01N33/53;G;G01;G01N;G01N27;G01N33;G01N27/327;G01N27/38;G01N27/48;G01N33/53
申请人地址：	212013 江苏省镇江市京口区学府路301号
主权项：	1.一种用于同时检测黄曲霉毒素B1和赭曲霉毒素A的比率电化学适配体传感器的制备方法，其特征在于，包括如下步骤： (1)将金电极AuE依次用不同粒径的三氧化二铝粉末打磨，并依次在乙醇和水中超声清洗，然后在硫酸溶液中使用循环伏安对电极进行电化学清洗； (2)将蒽醌-2-羧酸标记的互补发夹DNA即AQ-hDNA，修饰到经步骤(1)处理后的电极上，室温条件下存放一段时间，利用金-硫键将AQ-hDNA固定在金电极表面； (3)将巯基己醇修饰在步骤(2)处理后的电极上，室温条件下孵育一段时间，以封闭金的非特异性结合位点； (4)将二茂铁标记的黄曲霉毒素B1适配体Fc-Apt1修饰在步骤(3)处理后的电极上，在一定温度条件下反应一段时间，利用其与hDNA的互补杂交将Fc-Apt1组装在电极上； (5)将亚甲蓝标记的赭曲霉毒素A适配体MB-Apt2修饰在步骤(4)处理后的电极上，在一定温度条件下反应一段时间，利用互补杂交进一步将MB-Apt2组装在电极上，得到比率电化学适配体传感器，记为Fc-Apt1&MB-Apt2/MCH/AQ-hDNA/AuE。 2.根据权利要求1所述的一种用于同时检测黄曲霉毒素B1和赭曲霉毒素A的比率电化学适配体传感器的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，金电极的直径为2或3mm；所用的三氧化二铝粉末的粒径依次为0.3μm和0.05μm；所述循环伏安的扫描速率为50或100mV/s，扫描电位范围为-0.2～1.6V；所述硫酸溶液的浓度为0.01～0.1M。 3.根据权利要求1所述的一种用于同时检测黄曲霉毒素B1和赭曲霉毒素A的比率电化学适配体传感器的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，所述AQ-hDNA修饰的用量为4～8μL，所述AQ-hDNA的浓度为1～8μM，所述室温条件下存放一段时间为4～12小时。 4.根据权利要求1所述的一种用于同时检测黄曲霉毒素B1和赭曲霉毒素A的比率电化学适配体传感器的制备方法，其特征在于，步骤(3)中，MCH的用量为4～8μL，浓度为0.01～10mM；所述室温条件下孵育一段时间为0.5～2小时。 5.根据权利要求1所述的一种用于同时检测黄曲霉毒素B1和赭曲霉毒素A的比率电化学适配体传感器的制备方法，其特征在于，步骤(4)中，Fc-Apt1的用量为4～8μL，浓度为1～8μM；所述一定温度条件为37℃，反应时间为1～2小时。 6.根据权利要求1所述的一种用于同时检测黄曲霉毒素B1和赭曲霉毒素A的比率电化学适配体传感器的制备方法，其特征在于，步骤(5)中，MB-Apt2的用量为4～8μL，浓度为1～8μM；所述一定温度条件为37℃，反应时间为1～2小时。 7.将权利要求1-6任意一项所述方法制备的传感器用于同时检测黄曲霉毒素B1和赭曲霉毒素A的用途，其特征在于，包括如下步骤： (1)将所制备的多个传感器Fc-Apt1&MB-Apt2/MCH/AQ-hDNA/AuE依次滴加不同浓度的黄曲霉毒素B1和赭曲霉毒素A标准液，每个传感器对应一种浓度；室温下孵育一定时间后，使用Tris-HCl溶液进行冲洗；在三电极体系中，将冲洗后的电极作为工作电极，Ag/AgCl电极为参比电极，铂丝为对电极，以磷酸盐缓冲溶液为电解液，扫描电化学交流伏安曲线，测量比率信号IFc/IAQ和IMB/IAQ，建立黄曲霉毒素B1和赭曲霉毒素A浓度分别对应比率信号IFc/IAQ和IMB/IAQ的标准线性曲线；其中，IFc为Fc氧化电流、IMB为MB氧化电流、IAQ为AQ氧化电流； (2)将待测样品溶液滴加在传感器Fc-Apt1&MB-Apt2/MCH/AQ-hDNA/AuE上，室温下孵育一定时间后，使用Tris-HCl溶液进行冲洗；在三电极体系中，将冲洗后的电极作为工作电极，Ag/AgCl电极为参比电极，铂丝为对电极，以磷酸盐缓冲溶液为电解液，扫描电化学交流伏安曲线，测量比率信号IFc/IAQ和IMB/IAQ，代入步骤(1)的标准线性曲线，实现对待测样品黄曲霉毒素B1和赭曲霉毒素A的同时检测。 8.根据权利要求7所述的用途，其特征在于，步骤(1)中所述黄曲霉毒素B1的浓度范围为1×10-11～3×10-9g/mL，OTA浓度范围为3×10-11～1×10-8g/mL。 9.根据权利要求7所述的用途，其特征在于，步骤(1)和(2)中所述的室温下孵育一定时间均为0.5～2小时。
所属类别：	发明专利