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原文传递一种检测黄曲霉毒素B1电化学适配体传感器的制备方法

专利名称：	一种检测黄曲霉毒素B1电化学适配体传感器的制备方法
摘要：	本发明创造提供了一种检测黄曲霉毒素B1电化学适配体传感器的制备方法，包括如下步骤，1)对工作电极滴加介孔碳；2)恒电位沉积金纳米粒子对CMK/GCE进行修饰；3)滴加一端修饰有巯基的AFB1适配体于AuNPs/CMK/GCE电极上；4)将Apt/AuNPs/CMK/GCE浸入亚甲基蓝(MB)溶液中，将MB吸附于适配体链上得MB‑Apt/AuNPs/CMK/GCE电极；5)检测还原峰电流值。本发明创造所述的检测黄曲霉毒素B1电化学适配体传感器可以达到对目标物定量检测的目的，快速和操作简单的特点克服了大型检测仪器操作复杂，检测周期长的弊端。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	天津;12
申请人：	天津科技大学
发明人：	刘冰;赵耀帅;吴秋月;潘明飞;王硕
专利状态：	有效
申请日期：	2019-03-25T00:00:00+0800
发布日期：	2019-06-11T00:00:00+0800
申请号：	CN201910228145.X
公开号：	CN109870497A
代理机构：	天津合正知识产权代理有限公司
代理人：	陈松
分类号：	G01N27/48(2006.01);G;G01;G01N;G01N27
申请人地址：	300457 天津市滨海新区第十三大街9号
主权项：	1.一种检测黄曲霉毒素B1电化学适配体传感器的制备方法，所述传感器包含有工作电极、参比电极和对电极，所述工作电极为玻碳电极，参比电极为饱和氯化钾甘汞电极，对电极为铂柱电极，其特征在于：由如下步骤制备： 1)对工作电极修饰介孔碳：取适量介孔碳溶解在N，N-二甲基甲酰胺水溶液中，超声得到均匀分散的介孔碳悬浮液，将介孔碳修饰在工作电极表面来增大工作电极的表面积； 2)金纳米粒子的修饰：将步骤1)修饰好的工作电极浸入HAuCl4和H2SO4混合溶液中恒电位沉积，以改变工作电极的表面性能； 3)连接AFB1适配体：将一端修饰有巯基的AFB1适配体作为识别原件滴加于步骤2)修饰好的工作电极上； 4)亚甲基蓝的引入：步骤3)得到的连接AFB1适配体的工作电极浸入亚甲基蓝溶液中，亚甲基蓝吸附于适配体链上； 5)检测还原峰电流值：AFB1与工作电极上适配体的结合，将不同浓AFB1滴加在步骤4)修饰好的工作电极；差分脉冲伏安法检测，经孵育后在磷酸盐缓冲液中用差分脉冲伏安法测定还原峰电流值，根据产生电流情况来分析与AFB1浓度之间的关系。 2.根据权利要求1所述一种检测黄曲霉毒素B1电化学适配体传感器的制备方法，其特征在于：步骤1)对工作电极修饰介孔碳，具体方法为：取1mg介孔碳溶解在2ml N，N-二甲基甲酰胺水溶液中(v:v,1:1)，超声30min得到均匀分散的浓度为0.5mg mL-1的介孔碳悬浮液，取介孔碳悬浮液2-14μL滴加到预处理好的洁净工作电极上，自然晾干，得到介孔碳修饰的CMK/GCE工作电极。 3.根据权利要求1所述一种检测黄曲霉毒素B1电化学适配体传感器的制备方法，其特征在于：步骤2)金纳米粒子的修饰，具体方法为：将获得的CMK/GCE工作电极浸没于5mL HAuCl4和H2SO4的混合溶液中，铂柱电极作为对电极，饱和氯化钾甘汞电极作为参比电极，采用恒电位技术进行金纳米粒子的恒电位沉积，设定恒定电位为-0.2V，采样间隔为0.5s，沉积结束后取出工作电极用超纯水仔细冲洗，氮气吹干，在介孔碳修饰的基础上得到金纳米粒子修饰的AuNPs/CMK/GCE工作电极。 4.根据权利要求3所述一种检测黄曲霉毒素B1电化学适配体传感器的制备方法，其特征在于：所述HAuCl4和H2SO4的混合溶液中，HAuCl4浓度为2.5mmol/L，H2SO4浓度为0.5mol/L。 5.根据权利要求1所述一种检测黄曲霉毒素B1电化学适配体传感器的制备方法，其特征在于：步骤3)连接AFB1适配体，具体方法为： 5’端修饰有巯基的AFB1适配体用TE缓冲溶液配制成适配体稀释液，所配适配体稀释液pH值为8.0；取10μL适配体稀释液滴加在AuNPs/CMK/GCE工作电极表面并孵育过夜，取10μL巯基己醇MCH滴加在工作电极表面孵育，以封闭工作电极表面未与适配体连接的金纳米粒子的空余位点，得到Apt/AuNPs/CMK/GCE工作电极。 6.根据权利要求1所述一种检测黄曲霉毒素B1电化学适配体传感器的制备方法，其特征在于：步骤4)亚甲基蓝的引入，具体方法为：将Apt/AuNPs/CMK/GCE工作电极浸泡在MB溶液中10min，使MB通过静电作用和嵌入作用连接到适配体上，取出工作电极后用PBS仔细冲洗以去除未嵌入的MB，得到MB-Apt/AuNPs/CMK/GCE工作电极，氮气吹干备用。 7.根据权利要求1所述一种检测黄曲霉毒素B1电化学适配体传感器的制备方法，其特征在于：步骤5)检测还原峰电流值，具体步骤为： 1)AFB1与工作电极上适配体的结合：取10μL不同浓度的AFB1标准液滴加在MB-Apt/AuNPs/CMK/GCE工作电极上，孵育后用PBS仔细冲洗以去除工作电极表面未结合的AFB1，用氮气吹干，形成待检测工作电极； 2)差分脉冲伏安法检测：待检测工作电极浸入pH为7.4的PBS中，以饱和氯化钾甘汞电极为参比电极，以铂柱电极为对电极，在一定的电位范围下进行差分脉冲伏安法扫描。 8.权利要求1-7任一权利要求所述的一种检测黄曲霉毒素B1电化学适配体传感器的制备方法，其特征在于，制得的传感器用于AFB1的检测。
所属类别：	发明专利