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原文传递基于酶控循环信号放大策略的血清中碱性磷酸酶双模式检测方法

专利名称：	基于酶控循环信号放大策略的血清中碱性磷酸酶双模式检测方法
摘要：	本发明公开了一种基于酶控循环信号放大策略的血清中碱性磷酸酶双模式检测方法。Ag+将TMB氧化为TMBox。基于TMBox吸收带与无配体上转换纳米颗粒（UCNPs）发射带之间的良好重叠，从而通过内滤效应（IFE）有效地猝灭UCNPs的荧光。在ALP催化抗坏血酸盐去磷酸过程中生成抗坏血酸（AA），生成的AA不仅可以与Ag+反应抑制TMBox的产生，还可以与TMBox反应使之还原成TMB导致IFE过程的终止并导致UCNPs的荧光恢复。该方法不仅克服了荧光供体和荧光受体之间距离的限制，而且制备简单、快速灵敏、操作简单、抗干扰性好，为复杂体系中ALP的实时监测提供理论依据和技术支持。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	福建;35
申请人：	福州大学
发明人：	吕海霞;赵天禄;陈为栓
专利状态：	有效
申请日期：	2023-08-07T00:00:00+0800
发布日期：	2023-11-07T00:00:00+0800
申请号：	CN202310985346.0
公开号：	CN117007569A
代理机构：	福州元创专利商标代理有限公司
代理人：	俞舟舟;蔡学俊
分类号：	G01N21/64;G01N21/33;G01N21/78;G01N33/573;G;G01;G01N;G01N21;G01N33;G01N21/64;G01N21/33;G01N21/78;G01N33/573
申请人地址：	350108 福建省福州市闽侯县福州大学城乌龙江北大道2号福州大学
主权项：	1.一种基于酶控循环信号放大策略的血清中碱性磷酸酶双模式检测方法，其特征在于，所述的检测方法包括有以下步骤：（1）采用溶剂热法制备六方相上转换纳米颗粒，再利用盐酸处理制备水溶性无配体上转换纳米颗粒；（2）将碱性磷酸酶溶液、抗坏血酸盐溶液、HAc-NaAc缓冲液混合孵育60 min，随后，加入HAc-NaAc缓冲液、无配体上转换纳米颗粒、硝酸银溶液和3, 3', 5, 5' -四甲基联苯胺溶液混合，孵育20 min，测定混合液的紫外吸收强度和荧光强度，并计算荧光恢复效率（F-F0）/ F0，其中，F0为碱性磷酸酶浓度为零时，混合溶液的荧光强度，F为无配体上转换纳米颗粒与碱性磷酸酶同存在时对应的荧光强度；（3）以碱性磷酸酶浓度为横坐标，分别以紫外吸收强度和荧光恢复效率（F-F0）/ F0为纵坐标绘制标准曲线；（4）将待测血清样品稀释20倍后取代步骤（2）中的碱性磷酸酶溶液，并按照步骤（2）中的方法孵育后检测待测样品的紫外吸收强度和荧光强度；将所得紫外吸收强度和荧光强度数值带入步骤（3）获得的标准曲线中，再通过计算即得到血清样品中碱性磷酸酶的浓度。 2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述无配体上转换纳米颗粒为UCNPs，其制备方法包括以下步骤：（1）将0.2366 g六水氯化钇、0.0775 g六水氯化镱、0.0076 g六水氯化铒、6 mL油酸和15 mL 1-十八烯混合，通入氩气后在磁力搅拌下缓慢升温至110 ℃除水10 min后，加热至160 ℃，保持30 min至稀土氯化盐完全溶解后冷却至50 ℃；加入10 mL溶有0.1482 g氟化铵和0.1 g氢氧化钠的甲醇溶液并保温30 min，待反应结束后，升温至110 ℃除去甲醇和水，然后将温度升至300 ℃反应90 min，反应完后冷却至室温，加入乙醇沉降后，离心收集纳米粒子，用乙醇和环己烷洗涤三次，保存于5 mL环己烷中，即得OA-UCNPs；（2）取2 mL步骤（1）制得的OA-UCNPs，加入2 mL 2 mol/L HCl溶液并超声1 h，随后，在转速为13000 rpm的条件下离心30 min，用去离子水洗涤沉淀物三次，分散于2 mL去离子水中获得无配体UCNPs。 3. 根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤（2）中所用3, 3', 5, 5' -四甲基联苯胺溶液的浓度为240 μM；抗坏血酸盐溶液的浓度为150 μM。 4. 根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，荧光法标准曲线回归方程为Y=0.00515+0.24031X，R2=0.9975；其中，Y为（F-F0）/ F0，X为碱性磷酸酶浓度。 5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，比色法标准曲线回归方程为Y=0.47533+0.0475X，R2=0.9939；其中，Y为紫外吸收强度，X为碱性磷酸酶浓度。
所属类别：	发明专利