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原文传递基于AgNPs和ROP信号放大策略的OTA超灵敏电化学检测试剂盒及应用

专利名称：	基于AgNPs和ROP信号放大策略的OTA超灵敏电化学检测试剂盒及应用
摘要：	本发明公开了基于AgNPs和ROP信号放大策略的OTA超灵敏电化学检测试剂盒及应用，该试剂盒包括以下原料：金电极、Aptamer、1,6己二硫醇、AgNPs、OTA抗体‑PEI溶液、NCA‑Fc单体。本发明通过Au‑S键将1,6己二硫醇修饰到金电极上，然后加入AgNPS将其修饰到HDT上，接着将一端修饰巯基的适配体与AgNPS连接，然后加入赭曲霉素A使其与适配体结合，之后加入OTA抗体‑聚乙烯亚胺，与OTA特异性识别，聚乙烯亚胺上的氨基引发ROP反应，形成大量电活性探针标记的聚合物。本发明基于AgNPS和ROP信号放大策略大大提高了检测灵敏度，且具有稳定性好以及重现性好的特点，在实际样品的检测中具有很大的潜力。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	河南;41
申请人：	河南中医药大学
发明人：	李一帆;李坤华;张晨煜;崔真真;杨怀霞;郭亮;刘艳菊
专利状态：	有效
申请日期：	2023-08-04T00:00:00+0800
发布日期：	2023-11-03T00:00:00+0800
申请号：	CN202310975018.2
公开号：	CN116990370A
代理机构：	郑州中鼎万策专利代理事务所(普通合伙)
代理人：	徐文婷
分类号：	G01N27/327;G01N27/48;G;G01;G01N;G01N27;G01N27/327;G01N27/48
申请人地址：	450000 河南省郑州市郑东新区金水东路156号
主权项：	1.基于AgNPs和ROP信号放大策略的OTA超灵敏电化学检测试剂盒，其特征在于，包括以下原料：金电极、Aptamer、1,6己二硫醇、AgNPs、OTA抗体-PEI溶液、NCA-Fc单体。 2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，还包括DMF、超纯水、LiClO4。 3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，部分原料使用时需配制成溶液，其中，Aptamer溶液的浓度为1μM，1,6己二硫醇溶液的浓度为2mM，AgNPs溶液的浓度为20mg mL-1，NCA-Fc单体溶液的浓度为10mM； Aptamer的序列为5′-SH-(CH2)6-GATCGGGTGTGGGTGGCGTAAAGGGAGCATCGGACACGCCACCCACACA-3’。 4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，OTA抗体-PEI溶液的制备方法为： ①将EDC溶液和NHS溶液等体积混合均匀； ②将OTA抗体溶液和步骤①的溶液等体积混合，反应活化； ③在步骤②反应液中按照体积比3:1的比例加入PEI溶液，反应，得到OTA抗体-PEI溶液。 5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，EDC溶液的浓度为200mM，NHS溶液的浓度为50mM，OTA抗体溶液的浓度为6mg mL-1，PEI溶液浓度为1mg mL-1；步骤②的活化温度为37℃，时间为1-3h；步骤③的反应温度为37℃，反应时间为1-3h。 6.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，NCA-Fc单体的制备方法为： ①称取3mmol二茂铁甲酸溶于60mL DCM中，0℃条件下滴加6mmol三乙胺，再加入3mmolHBTU和3mmol HOBT，0℃反应1h后，旋转蒸干溶剂DCM，得到产物Fc-OBT； ②将1230μL TFA在0℃条件下滴入叔丁氧羰基-L-赖氨酸环内酸酐溶液中，0℃反应1h后，移入室温搅拌过夜，得到NCA产物； ③将6mmol三乙胺在0℃条件下滴入所制备的3mmol Fc-OBT中，然后加入所制备的3mmol NCA，室温反应，通过薄层色谱法监测反应过程，反应结束后，依次用饱和NaHCO3溶液、0.5M盐酸溶液、饱和NaHCO3溶液和超纯水洗涤，DCM有机相萃取，用无水Na2SO4干燥、过滤，真空干燥，得到单体NCA-Fc。 7.一种利用权利要求1-6任一项所述试剂盒检测OTA的方法，其特征在于，包括以下步骤： (1)将金电极浸泡在1,6己二硫醇溶液中，反应； (2)将AgNPs溶液滴加到步骤(1)的电极上，反应； (3)将Aptamer溶液滴加到步骤(2)的电极上，反应； (4)将待检测样品溶液滴加到步骤(3)的电极上，反应； (5)将OTA抗体-PEI溶液滴加到步骤(4)的电极上，反应； (6)将NCA-Fc单体溶液滴加到步骤(5)的电极上，反应； (7)将步骤(6)的电极置于LiClO4溶液中测量电化学信号。 8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，步骤(1)-(5)反应后将金电极进行处理，处理方法为：将金电极用超纯水冲洗，氮气吹干；步骤(6)反应后将金电极进行处理，处理方法为：将金电极用DMF和超纯水冲洗，氮气吹干。 9.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，步骤(1)的反应温度为37℃，时间为1-3h；步骤(2)的反应温度为37℃，时间为0.5-1.5h；步骤(3)的反应温度为37℃，时间为0.5-1.5h；步骤(4)的反应温度为37℃，时间为0.5-1.5h；步骤(5)的反应温度为37℃，时间为0.5-1h；步骤(6)的反应条件为：真空，50℃反应0.5-1.5h。 10.一种权利要求1-6任一项所述试剂盒在制备检测OTA试剂中的应用。
所属类别：	发明专利