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原文传递维生素B12定量检测方法及其快速绘制标准曲线的方法

专利名称：	维生素B12定量检测方法及其快速绘制标准曲线的方法
摘要：	一种维生素B12定量检测方法，采用2个浓度的加标回收试验，平行测定2次，检验样品添加回收率与精密度，具体实验步骤如下：S101：标准溶液配制；S102：设定色谱条件；S103:标准曲线绘制；S104：检出限和定量限；S105：精密度与回收率实验；本发明的有益效果为实验所使用提取试剂无毒害，最大限度减少有毒有害试剂的使用，降低对实验人员的危害，样品前处理提取简便快捷，缩短了检测时间，提高了检测效率。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	河北;13
申请人：	河北伊莱莎生物技术有限公司
发明人：	刘建龙
专利状态：	有效
申请日期：	2023-07-14T00:00:00+0800
发布日期：	2023-11-03T00:00:00+0800
申请号：	CN202310866946.5
公开号：	CN116990423A
代理机构：	北京鑫知翼知识产权代理事务所(普通合伙)
代理人：	杨莹
分类号：	G01N30/06;G01N30/74;G;G01;G01N;G01N30;G01N30/06;G01N30/74
申请人地址：	072750 河北省保定市涿州市朝阳东路中关村和谷创新产业园A31
主权项：	1.一种维生素B12定量检测方法，采用2个浓度的加标回收试验，平行测定2次，检验样品添加回收率与精密度，具体实验步骤如下： S101：标准溶液配制； S102：设定色谱条件； S103:标准曲线绘制； S104：检出限和定量限； S105：精密度与回收率实验；其特征在于：所述实验中的试剂包括磷酸盐溶液，所述的磷酸盐溶液的配制方法为：0.62g NaH2PO4·2H2O+5.73gNa2HPO4·12H2O+9gNaCl，将蒸馏水溶解并定容至1000ml，混匀。 2.根据权利要求1所述的一种维生素B12定量检测方法，其特征在于：所述步骤S104检出限和定量限计算过程如下：以3倍信噪比计算方法得出检出限为0.2μg/kg，10倍信噪比计算方法得出定量限为0.5μg/kg。 3.根据权利要求1所述的一种维生素B12定量检测方法，其特征在于：所述步骤S105的精密度与回收率实验方法如下：选择待测样品为基质，对样品添加两个浓度进行加标回收率实验，平行测定6次，检测出基质加标维生素B12回收率和相对标准偏差。 4.根据权利要求1所述的一种维生素B12定量检测方法，其特征在于：所述步骤S103标准曲线绘制过程如下：将质量浓度分别为1、5、10、50、100、500ng/ml的维生素B12标准工作溶液系列进行测定，以维生素B12的峰面积为纵坐标，以其相应质量浓度为横坐标绘制标准曲线。 5.根据权利要求4所述的一种维生素B12定量检测方法，其特征在于：所述步骤S101的方法如下：维生素B12标准储备液(1mg/ml)：准确称取1mg纯度折算为100％质量维生素B12标准品，加入1ml甲醇溶解，摇匀，避光冷藏保存；维生素B12标准中间液(10mg/L)：准确移取标准储备液100μL至100mL棕色容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，避光保存；维生素B12标准工作液：将标准中间液用流动相纯水与乙腈体积比15:85梯度稀释至1、5、10、50、100、500ng/ml。 6.根据权利要求4所述的一种维生素B12定量检测方法，其特征在于：所述步骤S102中的条件如下：色谱柱：Athena C18，120A，柱体参数为4.6×150mm，5μm；流动相：乙腈：水＝15:85，单位为：v/v；流速：0.5ml/min；柱温：35℃；进样量：20μL；紫外检测器，检测波长：361nm。 7.一种维生素B12定量检测中快速绘制标准曲线的方法，其特征在于：根据权利要求4-6任一所述的一种维生素B12定量检测方法，通过步骤S103获取历史标准曲线结果，再进行如下实验步骤： S201：配制单点质量浓度的标准溶液； S202：设定色谱条件； S203：根据所述的历史标准曲线结果绘制当前标准曲线； S204：根据绘制当前标准曲线检测待测样品质量浓度。 8.根据权利要求7所述的一种维生素B12定量检测中快速绘制标准曲线的方法，其特征在于：所述步骤S201的方法如下：维生素B12标准储备液(1mg/ml)：准确称取1mg纯度折算为100％质量维生素B12标准品，加入1ml甲醇溶解，摇匀，避光冷藏保存；维生素B12标准中间液(10mg/L)：准确移取标准储备液100μL至100mL棕色容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，避光保存；维生素B12标准工作液：将标准中间液用流动相纯水与乙腈体积比15:85梯度稀释至50ng/ml。 9.根据权利要求7所述的一种维生素B12定量检测中快速绘制标准曲线的方法，其特征在于：所述步骤S203标准曲线绘制过程如下：将质量浓度为50ng/ml的维生素B12标准工作溶液进行测定，获取质量浓度为50的维生素B12标准工作溶液的峰面积，再通过如下公式计算1、5、10、50、100、500ng/ml的维生素B12的峰面积： S当前＝C当前×S历史÷C历史其中，C当前为当前维生素B12的浓度值，具体分别为1、5、10、50、100、500ng/ml，C历史历史上维生素B12的浓度值，具体为50ng/ml，S当前为质量浓度分别为1、5、10、50、100、500ng/ml的维生素B12标准工作溶液的峰面积，S历史为质量浓度为50ng/ml的维生素B12标准工作溶液的峰面积；将质量浓度分别为1、5、10、50、100、500ng/ml的维生素B12标准工作溶液系列为绘制标准曲线的横坐标，以对应维生素B12的峰面积为纵坐标绘制标准曲线。。
所属类别：	发明专利