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原文传递维生素B12的测定方法

专利名称：	维生素B12的测定方法
摘要：	本申请涉及分析化学技术领域，具体涉及一种维生素B12的测定方法；该测定方法包括如下步骤：取含有维生素B12的供试品，加入铁氰化钾溶液、盐酸溶液以及第一溶剂混合，得到混合液，然后于38℃～42℃进行分散，然后于100±2℃保温，制得供试品溶液，供试品溶液进行液相色谱分析，测定维生素B12的含量；该测定方法具有较高的灵敏度，选择性好，安全性高，制备容易，操作简单，节省成本，检测结果可靠。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	北京;11
申请人：	北京斯利安药业有限公司
发明人：	王家龙;崔德林;杨卓理;韩雅慧;李爱琴;李雪莲;刘艳聪;闫东海;苏小楠
专利状态：	有效
申请日期：	2023-08-28T00:00:00+0800
发布日期：	2023-11-24T00:00:00+0800
申请号：	CN202311092687.1
公开号：	CN117110501A
代理机构：	北京华进京联知识产权代理有限公司
代理人：	王永莉
分类号：	G01N30/06;G01N30/74;G;G01;G01N;G01N30;G01N30/06;G01N30/74
申请人地址：	100176 北京市大兴区北京经济技术开发区运成街3号1号楼
主权项：	1.一种维生素B12的测定方法，其特征在于，包括如下步骤：取含有维生素B12的供试品与铁氰化钾、盐酸和第一溶剂混合，制得混合液，取所述混合液于38℃～42℃进行分散，制得分散液，取所述分散液于100±2℃保温，制得供试品溶液；取所述供试品溶液进行液相色谱分析，测定维生素B12的含量；所述液相色谱分析的条件包括： (1)流动相A为乙腈，流动相B的成分包括：1)磷酸氢二钾，2)庚烷磺酸钠，和3)水，所述流动相B的pH值为6.5～6.9； (2)采用梯度洗脱，所述梯度洗脱的程序包括： 0～5min，维持所述流动相B的体积百分比为100％， 5min～15min，所述流动相B的体积百分比由100％下降至85％， 15min～20min，所述流动相B的体积百分比由85％下降至80％， 20min～35min，所述流动相B的体积百分比由80％下降至60％， 35min～39min，维持所述流动相B的体积百分比为60％， 39min～40min，所述流动相B的体积百分比由60％上升至100％， 40min～50min，所述流动相B的体积百分比维持100％；和 (3)检测波长包括355nm～365nm和545nm～555nm。 2.根据权利要求1所述维生素B12的测定方法，其特征在于，所述液相色谱分析的进样量为200μL；和/或所述供试品为包含维生素B12的复合维生素；和/或所述分散的步骤包括：取所述混合液在80r/min～100r/min进行分散。 3.根据权利要求2所述维生素B12的测定方法，其特征在于，所述复合维生素中，维生素B12的含量为0.4μg/g～2.8μg/g。 4.根据权利要求1所述维生素B12的测定方法，其特征在于，所述液相色谱分析的条件还包括如下至少一种： (1)所述液相色谱分析为超高效液相色谱分析； (2)所述梯度洗脱的流速为0.8mL/min～1.2mL/min； (3)所述液相色谱分析中色谱柱的柱温为25℃～35℃； (4)所述液相色谱分析的色谱柱为C18色谱柱； (5)所述流动相B中：所述磷酸氢二钾在所述流动相B中的摩尔浓度为40mmol/L～60mmol/L，所述庚烷磺酸钠在所述流动相B中的质量浓度为0.08％～0.12％。 5.根据权利要求1所述维生素B12的测定方法，其特征在于，所述制备混合液的步骤包括：提供铁氰化钾的水溶液，其中含有铁氰化钾的质量浓度2.8％～3.2％，提供盐酸的水溶液，其中盐酸的浓度0.8mol/L～1.2mol/L，提供乙腈的水溶液，其中乙腈的体积浓度为4％～6％，取所述供试品、所述氰化钾的水溶液、所述盐酸的水溶液和所述乙腈的水溶液混合，制得所述混合液；其中，所述铁氰化钾溶液、所述盐酸溶液和所述第一溶剂的体积比为1：(0.8～1.2)：(10～12)；所述供试品和所述混合液的质量体积比为0.01g/mL～0.02g/mL。 6.根据权利要求1所述维生素B12的液相色谱检测方法，其特征在于，所述取混合液进行分散的步骤中，分散的时间为20min～40min；和/或所述取分散液保温的步骤中，保温的时间为0.5h～2h。 7.根据权利要求1～6任一项所述维生素B12测定方法，其特征在于，所述的供试品溶液可稳定放置的时间为0～24h；进一步，所述可稳定放置的温度为0℃～35℃。 8.根据权利要求1～6任一项所述维生素B12的测定方法，其特征在于，所述测定维生素B12的含量的步骤包括：取用作对照品的维生素B12，加第二溶剂溶解，制得对照品溶液；取不同浓度的所述对照品溶液，分别按照所述液相色谱分析的条件进行测定并记录峰面积，根据不同浓度的峰面积建立线性方程；将所述供试品的检测结果代入所述线性方程进行计算。 9.根据权利要求8所述维生素B12的测定方法，其特征在于，所述对照品溶液的制备步骤中：所述第二溶剂包括乙腈和水，所述乙腈在所述第二溶剂中的体积浓度为4％～6％，和/或所述对照品溶液中含有所述维生素B12的质量体积浓度为0.03μg/mL～0.05μg/mL。 10.根据权利要求1～6任一项所述维生素B12测定方法，其特征在于，所述测定的定量限浓度为10ng/mL～10.2ng/mL，检测限浓度为3.3ng/mL～3.5ng/mL。
所属类别：	发明专利