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原文传递一种快速检测烟气体内代谢标志物的分析方法

专利名称：	一种快速检测烟气体内代谢标志物的分析方法
摘要：	一种快速检测烟气体内代谢标志物的分析方法，包括烟气样品净化富集前处理和分析检测两部分，所述代谢物为可天宁或4‑（甲基亚硝胺基）‑1‑（3‑吡啶基）‑1‑丁醇（NNAL），其特征在于：先将代谢物采用β‑葡萄糖醛酸酶反应器进行水解后，再使用纳升级液相色谱‑质谱进行分析检测。本发明的创新点在于：酶反应器在线制备，水解效果更好，且可简化实验步骤，提高分析速度与分析灵敏度。首次将纳升液相色谱串联质谱应用于烟气代谢物领域。实验所需样品量极少，纳升级流速条件下，仅需要微纳克级样品，可以实现高灵敏检测与高通量分析。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	河南;41
申请人：	中国烟草总公司郑州烟草研究院;郑州大学
发明人：	邓楠;郭益;张明建;张柯;王乐;李斌;张书胜
专利状态：	有效
发布日期：	2019-01-01T00:00:00+0800
申请号：	CN201711137616.3
公开号：	CN107917983A
代理机构：	郑州中民专利代理有限公司 41110
代理人：	姜振东
分类号：	G01N30/88(2006.01)I;G;G01;G01N;G01N30;G01N30/88
申请人地址：	450001 河南省郑州市高新区枫杨街2号
主权项：	一种快速检测烟气体内代谢标志物的分析方法，包括烟气样品净化富集前处理和分析检测两部分，所述代谢物为可天宁或4‑（甲基亚硝胺基）‑1‑（3‑吡啶基）‑1‑丁醇（NNAL），其特征在于：先将代谢物采用在线制备的β‑葡萄糖醛酸酶反应器进行水解后，再使用纳升级液相色谱‑质谱进行分析检测，具体步骤如下：1）首先制备β‑葡萄糖醛酸酶反应器，具体方法如下：（1）整体柱基质的制备：A、将300 μL甲基丙烯酸缩水甘油酯（GMA）、100 μL三羟甲基丙烷三甲基丙烯酸脂（TRIM）涡旋混合均匀；将850μL环己醇与150μL十二醇混合均匀；取250 μL上述GMA‑TRIM混合液加入750μL的环己醇‑十二醇混合液中；B、称取10 mg的偶氮二异丁腈（AIBN）溶于上述溶液，超声脱气20min，涡旋10min至澄清透明，将其注入管壁活化后的毛细管柱中，用硅胶塞封住两端，50℃恒温水浴锅中反应24h；C、用甲醇冲洗柱中未反应完的溶剂后采用超纯水冲洗，使用5mM醋酸铵缓冲溶液冲洗；（2） β‑葡萄糖醛酸酶的修饰：将100 U/mL‑25000 U/mL β‑葡萄糖醛酸酶溶液通入上述（1）所制备的有机聚合物整体柱中，使整体柱基质上的环氧基与β‑葡萄糖醛酸酶的氨基一步反应完成酶的固定化；2）烟气代谢物的水解将浓度为0.05‑1.0mg.mL^‑1的底物4‑(甲基亚硝胺基)‑1‑(3‑吡啶基)‑1‑丁醇‑β‑O‑葡萄糖醛酸钠盐（NNAL‑O‑Gluc）以0.1‑1.0 μL/min的流速流穿过步骤1）制备的有机聚合物整体柱酶反应器，收集酶解液；3）分析检测将酶解液经过除盐、浓缩、复溶、超声、离心后，进行纳升级液相色谱质谱分析；色谱条件如下：流动相A: 98%水:2%乙腈，0.1%甲酸；流动相B: 98%乙腈‑2%水，0.1%甲酸；色谱柱型号：3C18‑CL‑120 (3 μm particle，120 Å, 0.075×150 mm）；柱温：21°C；流速：300 nL/min；进样体积：8μL；梯度洗脱；质谱条件如下：离子源电压为2300V；离子源温度为110℃；雾化气为6psi，辅助加热气为0psi，气帘气为30psi；去簇电压为80V，碰撞电压为10V；4‑（甲基亚硝胺基）‑1‑（3‑吡啶基）‑1‑丁醇（NNAL）的去簇电压：70V；碰撞电压：45V；碰撞电压差：5V；其糖苷衍生物4‑(甲基亚硝胺基)‑1‑(3‑吡啶基)‑1‑丁醇‑β‑O‑葡萄糖醛酸钠盐的去簇电压为70V；碰撞电压：60V；碰撞电压差：10V。
所属类别：	发明专利