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原文传递一种复合纳米材料电化学检测甲胎蛋白的方法

专利名称：	一种复合纳米材料电化学检测甲胎蛋白的方法
摘要：	一种复合纳米材料电化学检测甲胎蛋白的方法，以Fe3O4@Au为核，壳聚糖(CS)为壳，制备出Fe3O4@Au@CS复合纳米材料。以甲胎蛋白(AFP)为目标分析物，将人AFP抗体(Ab1)作为捕获探针固定于Fe3O4@Au@CS磁性复合纳米材料表面，鼠抗人AFP抗体(Ab2)和过氧化氢酶(HRP)作为检测探针标记到纳米金表面，利用抗原‑抗体的特异性构建夹心型免疫传感器Fe3O4@Au@CS‑Ab1@AFP@Ab2‑Au‑HRP；根据H2O2在HRP酶作用下会发生氧化反应，其氧化电流的大小和AFP的浓度呈线性关系，实现甲胎蛋白定量检测。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	广西;45
申请人：	桂林电子科技大学
发明人：	李桂银;李珊珊;周治德;梁晋涛;陆春婷
专利状态：	有效
发布日期：	2019-01-01T00:00:00+0800
申请号：	CN201810126072.9
公开号：	CN108375612A
代理机构：	桂林市华杰专利商标事务所有限责任公司 45112
代理人：	刘梅芳
分类号：	G01N27/30(2006.01)I;G01N27/327(2006.01)I;G01N27/48(2006.01)I;G;G01;G01N;G01N27;G01N27/30;G01N27/327;G01N27/48
申请人地址：	541004 广西壮族自治区桂林市七星区金鸡路1号
主权项：	1.一种复合纳米材料电化学检测甲胎蛋白的方法，包括磁性Fe3O4@Au复合纳米粒子制备，其特征在于：还包括如下步骤：1) 磁性Fe3O4@Au@CS纳米复合粒子的制备称取壳聚糖，溶于醋酸溶液，搅拌均匀；称取Fe3O4@Au纳米粒子，制成Fe3O4@Au溶液；取Fe3O4@ Au溶液加到壳聚糖溶液中超声反应，制得Fe3O4@Au@CS溶液，保存备用；2）纳米金溶液的制备量取氯金酸溶液，搅拌加热煮沸；量取柠檬酸钠溶液，滴加到沸腾的氯金酸溶液中反应，得到粒径为13 nm的纳米金溶液，冷藏备用；3）Fe3O4@Au@CS‑Ab1@AFP@Ab2‑Au‑HRP电化学免疫传感器的构建磁性Fe3O4@Au@CS标记Ab1抗体取磁性Fe3O4@Au@CS复合纳米粒子溶液，将Ab1抗体分次加至不断摇动的Fe3O4@Au@CS复合纳米粒子溶液中，在摇床摇动状态下放置一定时间，加入BSA封闭多余的非特异性活性位点并调节浓度；反应完成后，用含BSA的PBS溶液进行磁分离洗涤，用含BSA的PBS溶液调节标记有Ab1 抗体的磁性Fe3O4@Au@CS纳米粒子溶液的浓度，记为Fe3O4@Au@CS‑Ab1；纳米金标记HRP酶和Ab2抗体先用Na2CO3溶液调节纳米金溶液的pH值，加入Ab2和HRP酶，搅拌反应一段时间后，加入BSA溶液并搅拌；将溶液移至离心管中离心，离心结束后吸去上清液，将沉淀重新分散于含BSA的PBS溶液，制得Ab2‑Au‑HRP，保存备用；免疫反应过程吸取磁性Fe3O4@Au@CS‑Ab1纳米粒子溶液于聚苯乙烯微孔板的圆孔中，加入AFP抗原和Ab2‑Au‑HRP混合均匀孵育；经抗原和抗体的特异性免疫反应，获得Fe3O4@Au@CS‑Ab1@AFP@Ab2‑Au‑HRP电化学免疫传感器；4）甲胎蛋白AFP的定量检测电极的处理电化学检测采用传统的三电极系统：铂电极为对电极，饱和甘汞电极为参比电极，磁性玻碳电极（MGCE）为工作电极；在检测前，将磁性玻碳电极（MGCE）进行预处理；将预处理后的电极置于H2SO4中进行循环伏安扫描活化，扫描完成后用纯水冲洗干净备用；甲胎蛋白的定量检测将Fe3O4@Au@CS‑Ab1@AFP@Ab2‑Au‑HRP液体从微孔中吸取出来，分次滴加到已处理好的磁性玻碳电极上，吸去上清液；组装三电极系统，用含对苯二酚的PBS溶液作为测试底液，采用I‑T法进行测定；在摇动状态下往测试底液中加入H2O2，待电流稳定后，记录电流值；根据加入AFP的量与加入H2O2前后两个电流响应值来对AFP进行定量；5）实际血清样本的检测将采集的血清样本用pH值7.4 的PBS稀释5倍后，取1份稀释的血清代替步骤3）的AFP抗原，构建Fe3O4@Au@CS‑Ab1@AFP@Ab2‑Au‑HRP免疫传感器；按照步骤4）进行分析，根据加入的血清中AFP的量与加入H2O2前后两个电流响应值实现对血清中AFP的定量分析。
所属类别：	发明专利