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一种人血浆中小檗碱含量的定量检测方法
| 专利名称： | 一种人血浆中小檗碱含量的定量检测方法 |
| 摘要： | 本发明公开了一种人血浆中小檗碱含量的定量检测方法，包括如下步骤：(1)血浆样品前处理过程；(2)随性标准曲线样品的制备；(3)LC‑MS/MS测定过程；(4)标准曲线及浓度计算方法。该方法采用沉淀前处理、LC‑MS/MS质谱仪对人血浆中小檗碱的含量进行测定，操作简单、分离效果好、定性准确、检测灵敏度高。 |
| 专利类型： | 发明专利 |
| 国家地区组织代码： | 湖北;42 |
| 申请人： | 武汉宏韧生物医药科技有限公司 |
| 发明人： | 姜宏梁;张杨 |
| 专利状态： | 有效 |
| 发布日期： | 2019-01-01T00:00:00+0800 |
| 申请号： | CN201710159595.9 |
| 公开号： | CN108627577A |
| 代理机构： | 南京纵横知识产权代理有限公司 32224 |
| 代理人： | 薛海霞 |
| 分类号： | G01N30/02(2006.01)I;G01N30/06(2006.01)I;G;G01;G01N;G01N30;G01N30/02;G01N30/06 |
| 申请人地址： | 430075 湖北省武汉市东湖高新开发区高新大道666号生物创新园B4栋 |
| 主权项： | 1.一种人血浆中小檗碱含量的定量检测方法，其特征在于：包括如下步骤：(1)血浆样品前处理过程：取20.0～60.0μL人血浆样品，加入浓度为200ng·mL‑1内标甲苯磺丁脲工作溶液，再加入200‑400μL乙腈沉淀剂，涡旋混合3‑5分钟，于3～8℃的离心机中高速离心3～5分钟，取上清液并向上清液中加入体积比1:1的甲醇水溶液，涡旋混合3～5分钟，进行LC‑MS/MS分析；(2)随性标准曲线样品的制备：等量取数份200‑300μL人空白血浆，分别等量加入不同浓度盐酸小檗碱工作溶液5‑15μL，涡旋混匀，逐级配制成盐酸小檗碱浓度在0.05‑100ng·mL‑1之间的校正标样及质控样品，分别注入LC‑MS/MS中进行测定；(3)LC‑MS/MS测定过程：a.液相色谱条件：色谱柱为UItimateXB C18；流动相A：含0.05％甲酸和10mM乙酸铵的水溶液；流动相B：乙腈；柱温箱温度：30～50℃；流速：0.2～0.8mL/min；色谱柱平衡状态时的柱压：250‑400bar；洗脱方式为梯度洗脱；b.质谱条件：离子源为ESI源，采用正离子模式、多反应监测模式；电喷雾电压：4500～5500V；涡旋离子喷雾温度：550～650℃；气帘气种类：30psi；碰撞池气体：中级；雾化气种类Gas1：45psi；辅助气Gas 2：65psi；数据收集时间：2～5min；(4)标准曲线及浓度计算方法：根据步骤(2)所述校正标样的检测结果制作标准曲线，用步骤(2)所述质控样品的检测结果对标准曲线进行检测；所述标准曲线以盐酸小檗碱和内标甲苯磺丁脲的色谱峰面积比为纵坐标，以人血浆中盐酸小檗碱的浓度为横坐标，根据标准曲线计算人血浆样品中小檗碱的含量。 |
| 所属类别： | 发明专利 |
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