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原文传递一种人血浆中孟鲁司特的定量检测方法

专利名称：	一种人血浆中孟鲁司特的定量检测方法
摘要：	本发明属于孟鲁司特检测技术领域，公开了一种人血浆中孟鲁司特的定量检测方法，包括如下步骤：称取孟鲁司特和孟鲁司特钠‑d6，用甲醇和甲醇水溶液溶解稀释制备系列孟鲁司特工作溶液和系列内标工作溶液；利用内标工作溶液和乙腈沉淀剂对血浆样品前处理后进行LC‑MS/MS分析；再利用空白血浆和系列孟鲁司特工作溶液，配制成系列校正标样及质控样品，然后分别注入LC‑MS/MS中进行测定，以孟鲁司特和内标孟鲁司特钠‑d6的色谱峰面积比为纵坐标，以人血浆中孟鲁司特的浓度为横坐标制作标准曲线；根据标准曲线计算人血浆样品中的孟鲁司特浓度。本发明的优点在于，该方法检测快速、准确、灵敏度高、检测限低、操作简单且误差小。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	湖北;42
申请人：	康诚科瑞医药研发(武汉)有限公司
发明人：	李高;王华美
专利状态：	有效
申请日期：	2019-03-12T00:00:00+0800
发布日期：	2019-06-18T00:00:00+0800
申请号：	CN201910185495.2
公开号：	CN109900823A
代理机构：	成都顶峰专利事务所(普通合伙)
代理人：	王霞
分类号：	G01N30/02(2006.01);G;G01;G01N;G01N30
申请人地址：	430000 湖北省武汉市东湖新技术开发区高新大道666号光谷生物创新园C6栋107-108室
主权项：	1.一种人血浆中孟鲁司特的定量检测方法，其特征在于，包括如下步骤： (1)标准工作溶液的配制：称取孟鲁司特和孟鲁司特钠-d6，分别用甲醇溶解配制成孟鲁司特储备液和内标储备液；将所述孟鲁司特储备液和内标储备液分别用甲醇水溶液稀释成系列孟鲁司特工作溶液和系列内标工作溶液； (2)血浆样品前处理过程：取20.0～60.0μL待测人血浆，向其中加入内标工作溶液和乙腈沉淀剂，进行LC-MS/MS分析； (3)标准曲线配制过程：取空白血浆，向其中加入步骤(1)中所述的系列孟鲁司特工作溶液，配制成系列校正标样及质控样品，然后分别注入LC-MS/MS中进行测定，以孟鲁司特和内标孟鲁司特钠-d6的色谱峰面积比为纵坐标，以人血浆中孟鲁司特的浓度为横坐标制作标准曲线； (4)LC-MS/MS测定过程：根据标准曲线计算人血浆样品中的孟鲁司特浓度。 2.根据权利要求1所述的人血浆中孟鲁司特的定量检测方法，其特征在于，所述步骤(2)包括如下步骤：取人血浆样品，向人血浆样品中加入等量的步骤(1)中所述的内标工作溶液，再加入4倍于人血浆样品体积的乙腈沉淀剂，涡旋混合，于3～8℃的离心机中离心10～15分钟；取上清液并向上清液中加入与上清液等体积的纯化水，振荡混匀3～5分钟，进行LC-MS/MS分析。 3.根据权利要求1所述的人血浆中孟鲁司特的定量检测方法，其特征在于：所述步骤(1)中孟鲁司特工作溶液中孟鲁司特的浓度为20.0～12000ng·mL-1，所述内标工作溶液中孟鲁司特钠-d6的浓度为100～500ng·mL-1。 4.根据权利要求1所述的人血浆中孟鲁司特的定量检测方法，其特征在于，所述步骤(2)或(3)中LC-MS/MS测定过程中的工作条件为： a.色谱条件：色谱柱为WelchXB-C18，2.1×50mm；流动相A：含0.5％甲酸的水溶液；流动相B：乙腈；柱温箱温度：30～50℃；流速：0.2～0.8mL/min；洗脱方式为梯度洗脱； b.质谱条件：离子源为ESI源，采用正离子模式、多反应监测模式；电喷雾电压：5000～6000V；涡旋离子喷雾温度：550～650℃；气帘气：25psi；碰撞池气体：6unit；雾化气：40psi；辅助气：50psi；数据收集时间：3～5min。 5.根据权利要求1或4所述的人血浆中孟鲁司特的定量检测方法，其特征在于：所述步骤(2)或步骤(3)中LC-MS/MS测定过程中孟鲁司特的监测离子对为586.2/422.2，每次扫描一个离子对时所停留的时间150msec，去簇电压40V，碰撞能量35eV。 6.根据权利要求1或4所述的人血浆中孟鲁司特的定量检测方法，其特征在于：所述步骤(2)或步骤(3)中LC-MS/MS测定过程中内标孟鲁司特钠-d6的监测离子对为592.2/427.2，每次扫描一个离子对时所停留的时间150msec，去簇电压40V，碰撞能量35eV。 7.根据权利要求1所述的人血浆中孟鲁司特的定量检测方法，其特征在于：所述步骤(3)中的校正标样的个数为8～10个，所述校正标样中孟鲁司特的浓度为1.00～600ng·mL-1。 8.根据权利要求1所述的人血浆中孟鲁司特的定量检测方法，其特征在于：所述步骤(3)中的随行质控样品包括DQC、HQC、MQC、GMQC、LQC和LLOQ QC；所述DQC中孟鲁司特的浓度为1000ng·mL-1，稀释因子为5，所述HQC、MQC、GMQC、LQC和LLOQ QC中孟鲁司特的浓度依次分别为450ng·mL-1、300ng·mL-1、30.0ng·mL-1、3.00ng·mL-1和1.00ng·mL-1。 9.根据权利要求4所述的人血浆中孟鲁司特的定量检测方法，其特征在于，所述步骤(2)或步骤(3)中的色谱条件还包括：自动进样器清洗溶液为甲醇；自动进样器温度为4.0℃；自动进样器清洗模式为进样前清洗和进样后清洗；自动进样器洗针体积为200μL；自动进样器进样针清洗时浸泡时间为1s；自动进样器进样体积为20.0μL。 10.根据权利要求1所述的人血浆中孟鲁司特的定量检测方法，其特征在于：所述步骤(1)中甲醇水溶液中甲醇和水的体积比为1:1；所述步骤(2)中离心条件为在4℃、4000rpm或2270g离心10min。
所属类别：	发明专利