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原文传递一种血浆中左氧氟沙星的定量检测方法

专利名称：	一种血浆中左氧氟沙星的定量检测方法
摘要：	本发明属于左氧氟沙星检测技术领域，公开了一种血浆中左氧氟沙星的定量检测方法，包括：称取左氧氟沙星对照品和左氧氟沙星‑d8，用甲醇和甲醇水溶液溶解稀释成系列左氧氟沙星工作溶液内标工作溶液；利用内标工作溶液和甲醇沉淀剂预处理血浆样品，再进行LC‑MS/MS分析；再用空白血浆和系列左氧氟沙星工作溶液，配制成系列校正标样及随行质控样品，然后分别进行LC‑MS/MS测定，以左氧氟沙星和内标左氧氟沙星‑d8的色谱峰面积比为纵坐标，血浆中左氧氟沙星的浓度为横坐标制作标准曲线，计算血浆样品中的左氧氟沙星浓度。本发明的优点在于，该方法采用沉淀前处理、LC‑MS/MS质谱仪进行测定，操作快速简单、分离效果好、定性准确、检测灵敏度高。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	湖北;42
申请人：	康诚科瑞医药研发(武汉)有限公司
发明人：	李高;薛凯路
专利状态：	有效
申请日期：	2019-03-12T00:00:00+0800
发布日期：	2019-06-14T00:00:00+0800
申请号：	CN201910185474.0
公开号：	CN109884206A
代理机构：	成都顶峰专利事务所(普通合伙)
代理人：	王霞
分类号：	G01N30/02(2006.01);G;G01;G01N;G01N30
申请人地址：	430000 湖北省武汉市东湖新技术开发区高新大道666号光谷生物创新园C6栋107-108室
主权项：	1.一种血浆中左氧氟沙星的定量检测方法，其特征在于，包括如下步骤： (1)标准工作溶液的配制：称取左氧氟沙星对照品，用甲醇溶解配制成左氧氟沙星储备液，再用甲醇水溶液稀释成系列左氧氟沙星工作溶液；称取左氧氟沙星-d8，用甲醇溶解配制成内标储备液，再用甲醇水溶液稀释成系列内标工作溶液； (2)血浆样品前处理过程：取20.0～60.0μL血浆样品，向样品中加入内标工作溶液和甲醇沉淀剂，进行LC-MS/MS分析； (3)标准曲线配制过程：取空白血浆，向其中加入步骤(1)中所述系列左氧氟沙星工作溶液，配制成系列校正标样及随行质控样品，然后分别注入LC-MS/MS中进行测定，以左氧氟沙星和内标左氧氟沙星-d8的色谱峰面积比为纵坐标，以血浆中左氧氟沙星的浓度为横坐标制作标准曲线； (4)LC-MS/MS测定过程：根据标准曲线计算血浆样品中的左氧氟沙星浓度。 2.根据权利要求1所述的血浆中左氧氟沙星的定量检测方法，其特征在于，所述步骤(2)包括如下步骤：取20.0～60.0μL血浆样品，向样品中加入等量步骤(1)所述的内标工作溶液，然后加入8倍于血浆样品体积的甲醇沉淀剂，涡旋混合，于3～8℃的离心机中离心10～15分钟；取上清液并向上清液中加入4倍于上清液体积的纯化水，振荡混匀3～5分钟，进行LC-MS/MS分析。 3.根据权利要求1所述的血浆中左氧氟沙星的定量检测方法，其特征在于：所述步骤(1)中左氧氟沙星工作溶液中左氧氟沙星的浓度为100～100000ng·mL-1，所述步骤(1)中内标工作溶液中左氧氟沙星-d8的浓度为800～1000ng·mL-1。 4.根据权利要求1所述的血浆中左氧氟沙星的定量检测方法，其特征在于：所述步骤(2)或(4)中LC-MS/MS测定过程工作条件为： a.色谱条件：色谱柱为Gemini C18，5μm，2×50.0mm，Phenomenex；流动相A：含0.1％甲酸和10mM乙酸铵的水溶液；流动相B：含0.1％甲酸的乙腈；柱温箱温度：30～50℃；流速：0.2～0 8mL/min；洗脱方式为梯度洗脱； b.质谱条件：离子源为ESI源，采用正离子模式、多反应监测模式；电喷雾电压：5000～6000V；涡旋离子喷雾温度：450～550℃；气帘气：30psi；碰撞池气体：6unit；雾化气：50psi；辅助气：55psi；数据收集时间：3～5min。 5.根据权利要求1或4所述的一种血浆中左氧氟沙星的定量检测方法，其特征在于：所述步骤(2)或步骤(3)中LC-MS/MS测定过程中左氧氟沙星的监测离子对为362.2/318.2，每次扫描一个离子对时所停留的时间150msec，去簇电压80V，碰撞能量30eV。 6.根据权利要求1或4所述的血浆中左氧氟沙星的定量检测方法，其特征在于：所述步骤(2)或步骤(3)中LC-MS/MS测定过程中内标犬左氧氟沙星-d8的监测离子对为370.2/326.3，每次扫描一个离子对时所停留的时间150msec，去簇电压63V，碰撞能量30eV。 7.根据权利要求1所述的犬血浆中左氧氟沙星的定量检测方法，其特征在于：所述步骤(3)中的校正标样的个数为8～10个，所述校正标样中左氧氟沙星的浓度为5.00～5000ng·mL-1。 8.根据权利要求1所述的血浆中左氧氟沙星的定量检测方法，其特征在于：所述步骤(3)中随行质控样品包括HQC、MQC、GMQC和LQC，所述HQC、MQC、GMQC和LQC中左氧氟沙星的浓度分别依次为3750ng·mL-1、2500ng·mL-1、200ng·mL-1和15.0ng·mL-1。 9.根据权利要求4所述的血浆中左氧氟沙星的定量检测方法，其特征在于，所述色谱条件还包括：自动进样器清洗溶液为甲醇溶液，所述甲醇溶液的体积百分数为50％；自动进样器温度为4.0℃；自动进样器清洗模式为进样前清洗和进样后清洗；自动进样器洗针体积为2000μL；自动进样器进样针清洗时浸泡时间为3s；自动进样器进样体积为5.0μL。 10.根据权利要求1所述的人血浆中左氧氟沙星的定量检测方法，其特征在于：所述步骤(1)中甲醇水溶液中甲醇和水的体积比为1:1；所述步骤(2)中离心条件为4℃、4000rpm或2270×g离心10min。
所属类别：	发明专利