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原文传递一种血浆中曲司氯铵的定量检测方法

专利名称：	一种血浆中曲司氯铵的定量检测方法
摘要：	本发明属于曲司氯铵检测技术领域，公开了一种血浆中曲司氯铵的定量检测方法，包括如下步骤：(1)标准工作溶液的配制：分别将所述曲司氯铵储备液用体积比为1:1的甲醇水溶液稀释成多个曲司氯铵工作溶液；内标储备液用体积比为1:1的甲醇水溶液稀释成浓度为10～20ng·mL‑1的内标工作溶液；(2)待测血浆样品前处理过程；(3)标准曲线的制作：以曲司氯铵和曲司氯铵‑d8的色谱峰面积比为纵坐标，以曲司氯铵的血药浓度与曲司氯铵‑d8的血药浓度的比值为横坐标，采用加权最小二乘法进行线性回归制作标准曲线，得回归方程Y＝a+bX；(4)根据回归方程计算待测血浆样品中的曲司氯铵的血药浓度。本发明采用液相色谱‑质谱/质谱法进行测定，灵敏度高。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	湖北;42
申请人：	康诚科瑞医药研发(武汉)有限公司
发明人：	李高;张媛
专利状态：	有效
申请日期：	2019-03-12T00:00:00+0800
发布日期：	2019-06-14T00:00:00+0800
申请号：	CN201910185419.1
公开号：	CN109884205A
代理机构：	成都顶峰专利事务所(普通合伙)
代理人：	陈夏
分类号：	G01N30/02(2006.01);G;G01;G01N;G01N30
申请人地址：	430000 湖北省武汉市东湖新技术开发区高新大道666号光谷生物创新园C6栋107-108室
主权项：	1.一种血浆中曲司氯铵的定量检测方法，其特征在于：包括如下步骤： (1)标准工作溶液的配制：称取曲司氯铵至玻璃瓶中，加入甲醇，配制成浓度为1～10mg·mL-1的曲司氯铵储备液，分别将所述曲司氯铵储备液用体积比为1:1的甲醇水溶液稀释成多个曲司氯铵工作溶液，多个曲司氯铵工作溶液的浓度各不相同；称取曲司氯铵-d8至玻璃瓶中，加入甲醇配制成浓度为1～10mg·mL-1的内标储备液，用体积比为1:1的甲醇水溶液稀释成浓度为10～20ng·mL-1的内标工作溶液；曲司氯铵工作溶液及内标工作溶液均在-20℃下保存，备用； (2)待测血浆样品前处理过程：取待测血浆样品，向待测血浆样品中加入步骤(1)的内标工作溶液，然后加入乙腈沉淀剂，涡旋混合，离心取上清液并向上清液中加入纯化水，振荡混匀，进行液相色谱串联质谱/质谱测定，得待测血浆样品对应的曲司氯铵和曲司氯铵-d8的色谱图； (3)标准曲线的制作：等量取步骤(1)的多个曲司氯铵工作溶液，分别加入到空白血浆样品中，然后加入步骤(1)的内标工作溶液，再加入乙腈沉淀剂，涡旋混匀，离心取上清液并向上清液中加入纯化水，振荡混匀，分别得多个曲司氯铵校正标准溶液，进行液相色谱串联质谱/质谱测定，得一系列具有不同已知浓度的曲司氯铵校正标准溶液的色谱图，以曲司氯铵和曲司氯铵-d8的色谱峰面积比为纵坐标，以曲司氯铵的血药浓度与曲司氯铵-d8的血药浓度的比值为横坐标，采用加权最小二乘法进行线性回归制作标准曲线，得回归方程Y＝a+bX； (4)待测血浆样品中的曲司氯铵的血药浓度的计算：根据回归方程计算待测血浆样品中的曲司氯铵的血药浓度。 2.根据权利要求1所述的血浆中曲司氯铵的定量检测方法，其特征在于：步骤(2)中的离心条件为：离心温度为4℃，离心速度为4000rpm，离心时间为10min。 3.根据权利要求1所述的血浆中曲司氯铵的定量检测方法，其特征在于：按照步骤(1)中的曲司氯铵储备液的配制方式，平行配制另一份曲司氯铵储备液，将另一份曲司氯铵储备液分别稀释成浓度为300、200、20和3ng·mL-1的曲司氯铵工作溶液，分别加入到空白血浆样品中，然后加入步骤(1)的内标工作溶液，再加入乙腈沉淀剂，涡旋混匀，离心取上清液并向上清液中加入纯化水，振荡混匀，分别得四个质控样品，进行液相色谱串联质谱/质谱测定，得四个质控样品的色谱图。 4.根据权利要求1所述的血浆中曲司氯铵的定量检测方法，其特征在于：液相色谱串联质谱/质谱测定过程的工作条件为： a.液相色谱条件：2.1×50mm的色谱柱；流动相A为0.1％甲酸和2mM乙酸铵的水溶液；流动相B为乙腈；柱温为30～50℃；流速为0.2～0.8mL/min；洗脱方式为梯度洗脱； b.质谱条件：离子源为ESI源，采用正离子模式及多反应监测模式；电喷雾电压为4500～5500V；涡旋离子喷雾温度为500～600℃；气帘气的压力为30psi；雾化气的压力为50psi；辅助气的压力为55psi；数据收集时间为3～5min。 5.根据权利要求4所述的血浆中曲司氯铵的定量检测方法，其特征在于：所述液相色谱条件还包括：自动进样器的清洗溶液为50％的甲醇水溶液；自动进样器的温度为8℃；自动进样器的清洗模式为进样前清洗和进样后清洗；自动进样器的洗针体积为500μL；自动进样器进样针清洗时的浸泡时间为1s；自动进样器的进样体积为20μL。 6.根据权利要求5所述的血浆中曲司氯铵的定量检测方法，其特征在于：曲司氯铵在质谱条件中对应的监测离子对为392.0/164.2，去簇电压为60V，碰撞能量为45eV。 7.根据权利要求6所述的血浆中曲司氯铵的定量检测方法，其特征在于：曲司氯铵-d8在质谱条件中对应的监测离子对为400.0/172.2，去簇电压为60V，碰撞能量为45eV。 8.根据权利要求1-7任一项所述的血浆中曲司氯铵的定量检测方法，其特征在于：步骤(3)中的曲司氯铵校正标准溶液的数量为8～10个，曲司氯铵校正标准溶液的浓度为0.05～20ng·mL-1。
所属类别：	发明专利