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原文传递一种微藻细胞中的脂肪酸不饱和度的测定方法

专利名称：	一种微藻细胞中的脂肪酸不饱和度的测定方法
摘要：	本发明公开了一种微藻细胞中的脂肪酸不饱和度的测定方法，采用拉曼光谱仪获取微藻细胞样本的拉曼光谱原始信息，然后将所得的拉曼光谱原始信息依次进行预处理、去除宇宙射线、基线校正和去噪平滑处理，最终得到待测微藻细胞的拉曼光谱曲线，将待测微藻细胞在1660cm‑1和1445cm‑1下的拉曼峰强的比值作为x代入IV=‑8.0436x2+116.59x+9.469中，计算得到微藻细胞中的脂肪酸不饱和度，上述微藻拉曼光谱在1445cm‑1处的拉曼峰强要扣除β‑胡萝卜素在1445cm‑1的拉曼峰强的影响。该测定方法操作简单，时间短，省时省力。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	上海;31
申请人：	上海理工大学
发明人：	邵咏妮;朱亦鸣;庄松林;顾伟民
专利状态：	有效
发布日期：	2019-01-01T00:00:00+0800
申请号：	CN201810563785.1
公开号：	CN108663350A
代理机构：	上海申汇专利代理有限公司 31001
代理人：	吴宝根
分类号：	G01N21/65(2006.01)I;G;G01;G01N;G01N21;G01N21/65
申请人地址：	200093 上海市杨浦区军工路516号
主权项：	1.一种微藻细胞中的脂肪酸不饱和度的测定方法，其特征在于具体包括以下步骤：(1)、采用雷尼绍显微共焦拉曼光谱仪测定β‑胡萝卜素标准品的拉曼光谱曲线，计算β‑胡萝卜素标准品在1445cm‑1和1525cm‑1的拉曼峰强的比值为A；(2)、经琼脂固定的待测微藻细胞样品的制备①、将待测微藻接种到装有微藻培养基的250ml锥形瓶中，然后置于简易光生物培养机上，控制温度25℃、相对湿度为80％、光照强度2500Lux‑3500Lux进行光照培养一周，光照培养过程中每24h中光照12h、黑暗12h，得到微藻液；所述的待测微藻为蛋白核小球藻、微绿球藻、普通小球藻、衣藻或雨生红球藻；取稳定期的微藻液作为待测微藻液；取上述的待测微藻液8ml于15ml离心管中，然后加入2ml蒸馏水稀释藻液，得到稀释后的待测微藻液；②、用质量百分比浓度为2‑4％的琼脂水溶液固定步骤①所得的稀释后的待测微藻液中的待测微藻细胞，得到经琼脂固定的待测微藻细胞样品；(3)、通过双层刀片切取步骤(2)所得的经琼脂固定的待测微藻细胞样品，放置于载玻片上，盖上盖玻片，然后放置在雷尼绍显微共焦拉曼光谱仪的载物台上，控制温度为25℃，利用激光强度为1mv的激光束，并通过50X的物镜聚焦到经琼脂固定的待测微藻细胞样品的表面，曝光时间1s，在雷尼绍显微共焦拉曼光谱仪下进行观察将琼脂固定的待测微藻细胞样品，得到待测微藻细胞样品拉曼光谱原始信息，然后将所得到的待测微藻细胞样品拉曼光谱原始信息依次进行预处理、去除宇宙射线、基线校正和去噪平滑处理，最终得到待测微藻细胞的拉曼光谱曲线，进一步得到待测微藻细胞在1525cm‑1处的拉曼峰强为F1，在1445cm‑1的拉曼峰强为F2，在1660cm‑1的拉曼峰强为F5；所述的预处理是采用去趋势算法De‑trending对拉曼光谱原始信息进行处理；所述的去除宇宙射线是采用Renishaw的Wire3.3软件对拉曼光谱原始信息进行处理；所述的基线校正是采用Unscrambler软件对拉曼光谱原始信息进行处理；所述的去噪平滑处理是采用卷积平滑方法对拉曼光谱原始信息进行处理；(4)、利用β‑胡萝卜素标准品在1445cm‑1和1525cm‑1的拉曼峰强的比值A和待测微藻细胞拉曼光谱曲线在1525cm‑1处的拉曼峰强F1，计算出待测微藻细胞在1445cm‑1处其含有β‑胡萝卜素的拉曼峰强F3，即F3＝A*F1；(5)、将待测微藻细胞在1445cm‑1的拉曼峰强F2扣除其在1445cm‑1处其含有β‑胡萝卜素的拉曼峰强F3，即得到待测微藻细胞不含β‑胡萝卜素，仅为有效的脂肪酸在1445cm‑1的拉曼峰强F4，即F4＝F2‑F3；(6)、通过脂肪酸标准品不饱和度和1660cm‑1和1445cm‑1下的拉曼峰强的比值的关系，得到脂肪酸标准品不饱和度的计算公式：IV＝‑8.0436x2+116.59x+9.469，其中IV为脂肪酸标准品的不饱和度，x为脂肪酸标准品在1660cm‑1和1445cm‑1下的拉曼峰强的比值；(7)、将待测微藻细胞在1660cm‑1和1445cm‑1下的拉曼峰强的比值F5/F4作为x代入步骤(6)所得的公式IV＝‑8.0436x2+116.59x+9.469中，即得待测微藻细胞中的脂肪酸不饱和度值IV。
所属类别：	发明专利