原文传递
一种黄瓜根癌农杆菌敏感基因型的筛选方法
| 专利名称： | 一种黄瓜根癌农杆菌敏感基因型的筛选方法 |
| 摘要： | 本发明提供了一种黄瓜根癌农杆菌敏感基因型的筛选方法，属于蔬菜生物技术育种技术领域，包括以下步骤：将含有GUS基因植物表达载体的根癌农杆菌固态接种侵染黄瓜子叶节外植体；将侵染的外植体置于共培养基上黑暗培养；共培养结束后，切除外植体2/3的子叶，仅保留外植体的子叶节区，再浸没于GUS染色液中染色、脱色；根据GUS组织化学染色部位和染色面积进行染色分级，确定归属每个GUS瞬时表达级别的外植体数目，根据式I所示公式和分级情况计算得到GUS基因瞬时表达指数，当GUS瞬时表达指数值位于区间(55.56～77.77]时，判定为敏感基因型。本发明提供的筛选方法可以准确地评价不同基因型黄瓜对农杆菌侵染的敏感性，解决了传统GUS瞬时表达率难以区分不同基因型农杆菌敏感性的问题。 |
| 专利类型： | 发明专利 |
| 国家地区组织代码： | 山东;37 |
| 申请人： | 青岛市农业科学研究院 |
| 发明人： | 张功臣;张守才;李磊;秦玉红;王波;江志训;李磊;崔健;孙吉禄;王珍青;刘玲 |
| 专利状态： | 有效 |
| 发布日期： | 2019-01-01T00:00:00+0800 |
| 申请号： | CN201711106348.9 |
| 公开号： | CN107860774A |
| 代理机构： | 北京高沃律师事务所 11569 |
| 代理人： | 刘奇 |
| 分类号： | G01N21/84(2006.01)I;C12N15/82(2006.01)I;G;C;G01;C12;G01N;C12N;G01N21;C12N15;G01N21/84;C12N15/82 |
| 申请人地址： | 266000 山东省青岛市李沧区万年泉路168号 |
| 主权项： | 一种黄瓜根癌农杆菌敏感基因型的筛选方法，包括以下步骤：1)将含有GUS基因植物表达载体的根癌农杆菌固态接种侵染黄瓜子叶节外植体，得到侵染外植体；2)将所述步骤1)得到的侵染外植体置于共培养基上黑暗培养，得到黑暗培养后的外植体；3)对所述步骤2)得到的黑暗培养后的外植体进行处理，仅保留外植体的子叶节区，将处理后的外植体浸没于GUS染色液中染色10～12h，再置于乙醇溶液中脱色12～15h，得到除去叶绿素的外植体；4)根据步骤3)中除去叶绿素的外植体的GUS蓝色部位和显色面积进行GUS组织化学染色分级，确定归属每个GUS瞬时表达级别的外植体数目，根据式I所示公式和分级情况计算得到GUS基因瞬时表达指数，当所述GUS瞬时表达指数的范围值位于区间(55.55,77.77]时，判定待测黄瓜基因型为黄瓜根癌农杆菌敏感基因型；所述GUS组织化学染色分级分为5个GUS瞬时表达级别：0级 无GUS蓝色；1级 GUS蓝色的的组织或细胞部位呈点状分布，蓝色面积≤子叶节区面积的25％；2级 子叶节区面积的50％≥蓝色面积>子叶节区面积的25％，染色部位位于不定芽再生部位之外；3级 子叶节区面积的75％≥蓝色面积>子叶节区面积的50％，染色部位位于不定芽再生部位；4级 蓝色面积>子叶节区面积的75％，染色部位位于不定芽再生部位，所述4级为GUS瞬时表达级别的最高级别； |
| 所属类别： | 发明专利 |
检索历史
应用推荐
