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一种猪干扰素α生物学活性检测方法
| 专利名称： | 一种猪干扰素α生物学活性检测方法 |
| 摘要： | 本发明公开了一种猪干扰素α生物学活性检测方法及其应用。该方法包括以下步骤：采用PCR扩增获取猪Mx1蛋白的pMx1的基因片段；去除pEGFP‑N1载体质粒的pCMV；用PCR扩增获得的猪Mx1蛋白的pMx1的基因片段通过T4DNA连接酶替换原pEGFP‑N1载体质粒的pCMV，构建pEGFP‑N1‑pMx1质粒；用pEGFP‑N1‑pMx1质粒转染细胞，并通过新霉素筛选出稳定转染细胞株；对筛选出的稳定转染细胞株进行克隆化培养，加入猪干扰素α与克隆化培养后的稳定转染细胞株共孵育，会激活Mx1基因启动子活性促进细胞内EGFP的表达，通过激发光源照射后细胞发出荧光的强度与猪干扰素α的生物学活性呈正相关，因此可以定量评价猪干扰素α的生物学活性。 |
| 专利类型： | 发明专利 |
| 国家地区组织代码： | 安徽;34 |
| 申请人： | 安徽九川生物科技有限公司 |
| 发明人： | 单雪芹;王亚男;徐文俊;赵雨;蒋敏之;何志远;郭志燕 |
| 专利状态： | 有效 |
| 发布日期： | 2019-01-01T00:00:00+0800 |
| 申请号： | CN201810642055.0 |
| 公开号： | CN108845144A |
| 代理机构： | 北京科家知识产权代理事务所(普通合伙) 11427 |
| 代理人： | 陈娟 |
| 分类号： | G01N33/68(2006.01)I;G01N33/533(2006.01)I;C12N15/85(2006.01)I;C12N15/66(2006.01)I;G;C;G01;C12;G01N;C12N;G01N33;C12N15;G01N33/68;G01N33/533;C12N15/85;C12N15/66 |
| 申请人地址： | 241000 安徽省芜湖市经济技术开发区科创中心D园101、102室 |
| 主权项： | 1.一种猪干扰素α生物学活性检测方法，其包括以下步骤：采用PCR扩增获取猪Mx1蛋白的pMx1的基因片段；用PCR扩增获得的猪Mx1蛋白的pMx1的基因片段通过T4DNA连接酶替换原pEGFP‑N1载体质粒中的pCMV的基因片段，构建pEGFP‑N1‑pMx1质粒；用pEGFP‑N1‑pMx1质粒转染细胞，并通过新霉素筛选出稳定转染细胞株；对筛选出的稳定转染细胞株进行克隆化培养；以梯度稀释的猪干扰素α标准品制备标准曲线，确定干扰素效价与荧光值之间的数学逻辑关系；将待检猪干扰素α样品加入克隆化培养后的细胞中，然后检测荧光强度，结合标准曲线评价待检猪干扰素α样品的效价。 |
| 所属类别： | 发明专利 |
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