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一种在细胞水平上甜度的定量测定方法
| 专利名称： | 一种在细胞水平上甜度的定量测定方法 |
| 摘要： | 本发明提供一种在细胞水平上甜度的定量测定方法，包括胞内钙离子荧光染色、激光共聚焦扫描、显微镜测定胞内钙离子浓度变化等步骤。本发明的方法建立了利用荧光检测技术研究甜味受体细胞胞内钙离子浓度变化的方法，可在离体情况下定量人对其他未知样品甜味的感知程度，有效避免人类主观因素的影响。本发明的方法可以快速、高效、高灵敏检测化合物甜度，具有良好的应用前景。 |
| 专利类型： | 发明专利 |
| 国家地区组织代码： | 云南;53 |
| 申请人： | 云南中烟工业有限责任公司 |
| 发明人： | 颜克亮;苏莉;翁俊;陈微;陈兴;秦曦;朱阳进;尧晨光 |
| 专利状态： | 有效 |
| 申请号： | CN201811039127.9 |
| 公开号： | CN109142298A |
| 代理机构： | 北京市领专知识产权代理有限公司 11590 |
| 代理人： | 陈有业;任文娟 |
| 分类号： | G01N21/64(2006.01)I;G;G01;G01N;G01N21 |
| 申请人地址： | 650231 云南省昆明市五华区红锦路367号 |
| 主权项： | 1.一种在细胞水平上甜度的定量测定方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)将贴壁培养的HEK293细胞和HEK293‑T1R2/T1R3细胞按正常传代步骤进行悬浮细胞的制备，并分别种植于共聚焦培养皿中；(2)当步骤(1)的共聚焦培养皿中的贴壁培养的HEK293细胞和HEK293‑T1R2/T1R3细胞的汇合度达到40％‑60％时，用钙离子荧光探针溶液对种植于共聚焦培养皿中细胞进行孵育；(3)使用激光扫描共聚焦显微镜连续观测记录步骤(2)孵育后的细胞荧光图像至120s，分别获取HEK293细胞和HEK293‑T1R2/T1R3细胞的单个细胞在120s内各时间点的荧光强度值；设定前16s内最小荧光值为Fo，设定16s至120s内最大荧光值为Fm；其中在第16s时加入待测甜样品溶液；(4)用△F/Fo分别计算HEK293细胞和HEK293‑T1R2/T1R3细胞的荧光强度变化比率值，其中△F为Fm‑Fo；(5)将HEK293‑T1R2/T1R3细胞荧光强度变化比率△F/Fo值减去HEK293细胞荧光强度变化比率△F/Fo的值为△R；(6)设定某已知浓度下蔗糖溶液的甜度为1，F/Fo的值为△Rs；则步骤(5)得到的△R值与△Rs的比值，即为待测甜样品溶液的相对甜度。 |
| 所属类别： | 发明专利 |
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