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原文传递一种快速检测转基因植物中CP4-EPSPS的方法

专利名称：	一种快速检测转基因植物中CP4-EPSPS的方法
摘要：	本发明涉及基因工程技术领域，尤其是一种快速检测转基因植物中CP4‑EPSPS的方法，包括以下步骤：S1、制备除草剂草甘膦溶液；S2、将转基因植物与非转基因植物进行混合栽种在温室箱内，然后用喷洒壶对植物进行均匀喷洒，待2‑3天后观察情况；S3、将植株生长良好，没有枯叶的植物进行挂牌；S4、将制备好的植物蛋白提出液，倒入烧杯中，加入水并进行搅拌，然后加入CP4‑EPSPS蛋白检测试纸条，反应2‑5min，取出CP4‑EPSPS蛋白检测试纸条，对CP4‑EPSPS蛋白检测试纸条进行观察，得到检测结果。本发明具有增强了检测结果的准确性，同时检测过程简单方便，也加快了检测的速度。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	湖北;42
申请人：	武汉上成生物科技有限公司
发明人：	刘洁;陈建军;钟银;绍琴;王娟;马艳;李聪;刘路
专利状态：	有效
申请日期：	2019-05-27T00:00:00+0800
发布日期：	2019-08-06T00:00:00+0800
申请号：	CN201910445534.8
公开号：	CN110095613A
代理机构：	上海精晟知识产权代理有限公司
代理人：	冯子玲
分类号：	G01N33/68(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	430000 湖北省武汉市东湖新技术开发区高新大道666号生物创新园B8栋三楼C344
主权项：	1.一种快速检测转基因植物中CP4-EPSPS的方法，其特征在于，包括以下步骤： S1、制备除草剂草甘膦溶液，选取除草剂草甘膦，放置在喷洒壶中，然后加入水进行搅拌混合，其中除草剂草甘膦与水的重量比为3-5:100-120； S2、将转基因植物与非转基因植物进行混合栽种在温室箱内，然后用喷洒壶对植物进行均匀喷洒，待2-3天后观察情况； S3、将植株生长良好，没有枯叶的植物进行挂牌，然后分别采取植物的茎叶，将植物的茎叶进行剪碎，加单去污剂裂解液于匀浆器中，进行匀浆，3-5min后再置于冰上，重复碾3-5次使组织碾碎，裂解30-35min，将裂解液移至1.5ml离心管中，然后在4℃下12000rpm离心5-7min，取上清分装于0.5ml离心管中并置于－20℃保存； S4、将制备好的植物蛋白提出液，倒入烧杯中，加入水并进行搅拌，然后加入CP4-EPSPS蛋白检测试纸条，反应2-5min，取出CP4-EPSPS蛋白检测试纸条，对CP4-EPSPS蛋白检测试纸条进行观察，得到检测结果。 2.根据权利要求1所述的一种快速检测转基因植物中CP4-EPSPS的方法，其特征在于，在步骤S2时，对转基因植物与非转基因植物进栽种时，对非转基因植物进行标记。 3.根据权利要求1所述的一种快速检测转基因植物中CP4-EPSPS的方法，其特征在于,在步骤S2时中，进行喷洒除草剂草甘膦时，将温室箱的温度调节为25-30℃，并检测土壤的湿度，确保土壤的湿度为20％-24％，通过土壤湿度仪对土壤的湿度进行检测，当湿度不满足要求时，通过喷加水，待一段时间后，再次进行检测，确保土壤的湿度处于规定范围内。 4.根据权利要求1所述的一种快速检测转基因植物中CP4-EPSPS的方法，其特征在于，在步骤S3中，对植物的茎叶进行采取时，选取葱郁的完整的植物茎叶，在采摘后，并用采用清水进行冲洗，然后用毛刷进行刷拭，最后放置到清水中浸泡30-40min。 5.根据权利要求1所述的一种快速检测转基因植物中CP4-EPSP S的方法，其特征在于，单去污剂裂解液由Tris-HCl缓冲液、氯化钠、叠氮钠、苯甲基磺酰氟、抗蛋白酶肽、TritonX-100组成。 6.根据权利要求5所述的一种快速检测转基因植物中CP4-EPSP S的方法，其特征在于，其中叠氮钠浓度为0.02-0.03％。 7.根据权利要求1所述的一种快速检测转基因植物中CP4-EPSPS的方法，其特征在于，在步骤S4中，反应的温度为32-35℃。
所属类别：	发明专利