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原文传递一种母猪初乳中猪流行性腹泻病毒特异性IgA抗体的定量检测方法及试剂盒

专利名称：	一种母猪初乳中猪流行性腹泻病毒特异性IgA抗体的定量检测方法及试剂盒
摘要：	本发明公开了一种母猪初乳中猪流行性腹泻病毒特异性IgA抗体的定量检测方法及试剂盒，属于生物技术领域。其中本发明公开的方法和试剂盒基于胶体金免疫层析技术，操作简单、快速、非常适合临场检测。另外，本发明的方法通过无创伤采集产后母猪初乳进行检测，减少了对母猪的刺激，不会影响母猪进行产子或泌乳，并且通过定量检测母猪初乳中猪流行性腹泻病毒特异性IgA抗体效价的高低，可进一步区分母猪初乳对仔猪保护力的大小，可有效优化母猪抗猪流行性腹泻病毒的免疫方案以及筛选高质量疫苗。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	北京;11
申请人：	北京标驰泽惠生物科技有限公司
发明人：	郑金来;吴园园;郝金宝;卢小雨;张卉;李卫丽;周博;李丽燕
专利状态：	有效
申请日期：	2019-05-16T00:00:00+0800
发布日期：	2019-08-06T00:00:00+0800
申请号：	CN201910410251.X
公开号：	CN110095601A
代理机构：	北京尚诚知识产权代理有限公司
代理人：	鲁兵
分类号：	G01N33/569(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	102629 北京市大兴区中关村科技园区大兴生物医药产业基地庆丰西路29号E区2301号
主权项：	1.一种母猪初乳中猪流行性腹泻病毒特异性IgA抗体的定量检测方法，其特征在于，包括以下步骤：胶体金测试卡的制备：使用猪流行性腹泻病毒抗原和羊抗猪IgA抗体制备胶体金测试卡；标准曲线的制作：使用不同IgA抗体效价的母猪初乳制备标准样品；将所述各标准样品加入胶体金测试卡的样品孔中反应，反应后将测试卡插入免疫层析分析仪中进行检测，得到测定数值，并制作标准曲线；抗体效价测定：将待测母猪初乳样品加入胶体金测试卡的样品孔中反应，反应后将测试卡插入免疫层析分析仪中进行检测，得到测定数值，通过标准曲线确定待测母猪初乳样品的抗体效价。 2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述胶体金测试卡由胶体金试纸条装入塑料卡中制备得到，其中所述胶体金试纸条包括：吸水垫、硝酸纤维素膜、玻璃纤维素膜结合物释放垫、玻璃纤维素膜样品垫，其中所述硝酸纤维素膜上设有检测线和质控线；所述检测线上包被有羊抗猪IgA抗体，所述玻璃纤维素膜结合物释放垫上包被有猪流行性腹泻病毒抗原胶体金标记物。 3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述标准曲线的制作包括以下步骤： S1：用流行性腹泻病毒IgA抗体制备得到抗体效价分别为1:512、1:256、1:128、1:64、1:32、1:16、1:1的标准样品； S2：按1:10的比例稀释各效价的标准样品后，分别取稀释后的各效价的标准样品70μl，滴到胶体金测试卡的样品孔，计时20分钟，每个标准样品重复三次； S3：用免疫层析分析仪检测各效价标准样品的灰度值，并计算灰度值的平均值； S4：以灰度值的平均值为纵坐标Y，以标准样品抗体效价的倒数为横坐标X，用免疫层析分析仪绘制得到所述标准曲线。 4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述标准曲线的制作还包括： S5：将生成的标准曲线以QR-CODE格式打印二维码。 5.根据权利要求1至4任一项所述的方法，其特征在于，所述待测母猪初乳样品为对母猪初乳进行1:10稀释后的样品，所述母猪初乳为母猪产后48小时内的初乳。 6.根据权利要求3至5任一项所述的方法，其特征在于，用稀释液进行稀释，所述稀释液为磷酸盐缓冲液；优选配方为：NaH2PO4·2H2O 0.296g，Na2HPO4·12H2O 2.9g，双蒸水定溶至1000mL，pH值为7.2-7.4。 7.根据权利要求3至6任一项所述的方法，其特征在于，所述抗体效价测定步骤中，待测母猪初乳样品的测定数值为灰度值的平均值，依据该测定数值从所述标准曲线中读取抗体效价的倒数，该读数作为测定结果。 8.一种母猪初乳中IgA抗体水平对仔猪保护作用的评判方法，其特征在于，基于权利要求7所述定量检测方法中的测定结果，判断标准为：测定结果≥32为阳性，所述阳性代表待测母猪初乳样品中的IgA抗体水平能够对仔猪提供保护作用；测定结果＜32为阴性，所述阴性代表待测母猪初乳样品中的IgA抗体水平不足以保护仔猪。 9.一种母猪初乳中猪流行性腹泻病毒特异性IgA抗体的检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：权利要求1中提及的胶体金测试卡和权利要求6中提及的稀释液，以及权利要求4中提及的二维码；优选所述胶体金测试卡20个，为铝箔袋独立包装；所述稀释液为20瓶，每瓶含有630μl。 10.根据权利要求9所述试剂盒，其特征在于，还包括权利要求8中的判断标准说明。
所属类别：	发明专利