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原文传递一种功能化磷脂制备纳米单颗粒的方法及该纳米单颗粒的检测

专利名称：	一种功能化磷脂制备纳米单颗粒的方法及该纳米单颗粒的检测
摘要：	本发明涉及一种功能化磷脂制备纳米单颗粒的方法及该纳米单颗粒的检测。功能化脂质体纳米单颗粒制备过程如下：将磷脂DOPC与功能化磷脂Biotinyl PE分别溶解在氯仿中，按一定的比例混合后，氮气吹干溶剂，在容器底部形成一层均匀的薄磷脂膜；真空干燥以除净氯仿，随后再加入PBS缓冲溶液水化，震荡混匀后静置一段时间，然后用超声细胞破碎仪超声至溶液澄清，即可得尺寸均一的功能化脂质体纳米单颗粒(Biotin‑liposome)。利用其与Avidin‑SH修饰的金电极的特异性结合和电化学技术可以实现对电化学活性较差的脂质体单颗粒的检测。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	北京;11
申请人：	中国科学院化学研究所
发明人：	李峻柏;王克青;赵洁;付梅芳
专利状态：	有效
申请日期：	2019-05-08T00:00:00+0800
发布日期：	2019-08-09T00:00:00+0800
申请号：	CN201910380258.1
公开号：	CN110108624A
代理机构：	北京纪凯知识产权代理有限公司
代理人：	吴爱琴
分类号：	G01N15/10(2006.01);G;G01;G01N;G01N15
申请人地址：	100190 北京市海淀区中关村北一街2号
主权项：	1.一种功能化磷脂制备纳米单颗粒的方法，包括如下步骤： 1)将磷脂DOPC与功能化磷脂Biotinyl PE分别溶解在有机溶剂中得到磷脂DOPC溶液和功能化磷脂Biotinyl PE溶液，将上述两种溶液混合，将混合后体系中的溶剂去除，得到一层薄磷脂膜； 2)向步骤1)所得的薄磷脂膜中加入PBS缓冲溶液，混匀后静置，水合溶胀，超声分散，得到功能化脂质体纳米单颗粒的溶液。 2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤1)中，所述有机溶剂为氯仿；所述磷脂DOPC溶液中DOPC的浓度为8×10-4mol/L；所述功能化磷脂Biotinyl PE溶液中Biotinyl PE的浓度为2×10-4mol/L；混合后体系中，磷脂DOPC与功能化磷脂Biotinyl PE的浓度比为1:1-6:1；所述将混合后体系中的溶剂去除的操作为：用氮气吹干体系中的溶剂；上述方法在进行步骤2)之前，还进一步包括将所述薄磷脂膜干燥以去除残余溶剂的操作，所述干燥在真空干燥箱中进行；所述干燥的时间为6-12h。 3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：步骤2)中，所述薄磷脂膜水合溶胀步骤中，所述静置的时间为10-60min；所述超声分散的操作为：采用超声细胞破碎仪超声至溶液澄清；超声参数设置如下：功率70％，10s开，10s关，超声时长10-40min；所述功能化脂质体纳米单颗粒的溶液中，脂质体纳米单颗粒的浓度为500nM-5mM。 4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其特征在于：所述方法还进一步包括将功能化脂质体纳米单颗粒从所述功能化脂质体纳米单颗粒的溶液中分离出来的操作。 5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：所述操作为：采用膜过滤将所述功能化脂质体纳米单颗粒分离出来；所用膜的孔径为50-200nm。 6.由权利要求1-5中任一项所述方法制备得到的功能化脂质体纳米单颗粒。 7.一种检测由权利要求1所述方法制备得到的功能化脂质体纳米单颗粒的方法为：以Avidin-SH修饰的金微电极为工作电极构筑三电极体系，通过电化学技术实现所述功能化脂质体纳米单颗粒的检测。 8.根据权利要求8所述的方法，其特征在于：所述检测为：以Avidin-SH修饰的金微电极Au-S-Avidin作为工作电极，Ag/AgCl电极为参比电极，铂电极为对电极构筑三电极体系，甲醇二茂铁为电化学探针，在不同电位下检测加入一定浓度的功能化脂质体纳米单颗粒后的时间-电流曲线，观察分析实验结果。 9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于：所述Avidin-SH修饰的金微电极Au-S-Avidin通过包括下述步骤的方法制备得到：将金微电极清洗，然后在硫酸溶液中进行电化学活化，再用二次水清洗；将清洗后的金微电极浸泡在Avidin-SH溶液中，即得。 10.权利要求7-9中任一项所述方法在检测脂质体/载药脂质体纳米颗粒在细胞内分布、形态及其对细胞一些生理状态影响中的应用。
所属类别：	发明专利