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原文传递厚藤HPLC指纹图谱和UPLC指纹图谱的建立方法

专利名称：	厚藤HPLC指纹图谱和UPLC指纹图谱的建立方法
摘要：	本发明公开了厚藤HPLC/UPLC指纹图谱的建立方法，采用高效/超高效液相色谱，以厚藤中的主要成分绿原酸、咖啡酸、异槲皮苷、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C为参照物，据此获得了厚藤药材共有模式的HPLC/UPLC指纹图谱。其中，HPLC指纹图谱中可以检测到13个共有峰，UPLC指纹图谱可以检测到16个共有峰，10批厚藤药材HPLC指纹图谱与共有模式的相似度均大于0.956，10批厚藤药材UPLC指纹图谱与共有模式的相似度均大于0.945，厚藤HPLC指纹图谱、UPLC指纹图谱及其共有模式均可为厚藤的真伪鉴别、质量优劣提供科学的依据，可根据实际情况运用。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	广西;45
申请人：	广西中医药大学
发明人：	侯小涛;邓家刚;郝二伟;杜正彩;冯小慧;韦玮;秦健峰;易湘茜
专利状态：	有效
申请日期：	2019-06-03T00:00:00+0800
发布日期：	2019-08-09T00:00:00+0800
申请号：	CN201910478282.9
公开号：	CN110108828A
代理机构：	广西南宁公平知识产权代理有限公司
代理人：	杨立华
分类号：	G01N30/88(2006.01);G;G01;G01N;G01N30
申请人地址：	530200 广西壮族自治区南宁市青秀区五合大道13号
主权项：	1.一种厚藤HPLC指纹图谱的建立方法，其特征在于包括以下步骤： (1)制备对照品溶液：以甲醇为溶剂配制成含绿原酸0.5998mɡ/mL、咖啡酸0.0503mɡ/mL、异槲皮苷0.0698mɡ/mL、异绿原酸B 0.4001mɡ/mL、异绿原酸A 0.8001mɡ/mL、异绿原酸C0.6005mɡ/mL的混合对照品溶液； (2)供试品溶液的制备：精密称定厚藤药材粉末约2ɡ，置具塞锥形瓶中，加入70％甲醇20mL，称定重量，超声1h，取续滤液2mL过0.22μm微孔滤膜，备用； (3)色谱条件：色谱柱为安捷伦色谱柱，采用梯度洗脱，流动相为乙腈-0.1％磷酸水系统，紫外检测波长为254nm； (4)测定：精密吸取供试品溶液注入高效液相色谱仪测定，得到HPLC指纹图谱。 2.根据权利要求1所述的厚藤HPLC指纹图谱的建立方法，其特征在于步骤(1)按以下操作进行：精密称定适量绿原酸、咖啡酸、异槲皮苷、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C对照品，加甲醇分别定容于5mL棕色容量瓶，配制成绿原酸3.0080mɡ/mL、咖啡酸2.0960mɡ/mL、异槲皮苷2.0300mɡ/mL、异绿原酸B 3.0400mɡ/mL、异绿原酸A 3.0400mɡ/mL、异绿原酸C3.0480mɡ/mL的标准溶液；精密移取以上标准溶液配制成含绿原酸0.5998mɡ/mL、咖啡酸0.0503mɡ/mL、异槲皮苷0.0698mɡ/mL、异绿原酸B 0.4001mɡ/mL、异绿原酸A 0.8001mɡ/mL、异绿原酸C 0.6005mɡ/mL的混合对照品溶液。 3.根据权利要求1所述的厚藤HPLC指纹图谱的建立方法，其特征在于：步骤(3)的色谱条件为：色谱柱：Anglient HC-C18(2)色谱柱，250mm×4.6mm，5μm；流动相：乙腈-0.1％磷酸水溶液；流速：1.0ml/min；柱温：30±5℃；检测波长：λ＝254nm；进样量：5μL；洗脱梯度，A为乙腈：0～10min，7％～8％A；10～20min，8％～12％A；20～30min，12％～16％A；30～40min，16％～17％A；40～50min，17％～19％A；50～65min，19％～20％A；65～70min，25％～27％A；70～75min，25～27％A；85～86min，36～40％A；86～92min，40％～40％A；92～97min，40％～85％A。 4.根据权利要求1所述的厚藤HPLC指纹图谱的建立方法，其特征在于：所述HPLC指纹图谱共有峰13个，其中六个峰分别为绿原酸、咖啡酸、异槲皮苷、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C的色谱峰。 5.一种厚藤UPLC指纹图谱的建立方法，其特征在于包括以下步骤： (1)制备对照品溶液：以甲醇为溶剂配制成含绿原酸0.5998mɡ/mL、咖啡酸0.0503mɡ/mL、异槲皮苷0.0698mɡ/mL、异绿原酸B 0.4001mɡ/mL、异绿原酸A 0.8001mɡ/mL、异绿原酸C0.6005mɡ/mL的混合对照品溶液； (2)供试品溶液的制备：精密称定厚藤药材粉末约2ɡ，置具塞锥形瓶中，加入70％甲醇20mL，称定重量，超声1h，取续滤液2mL过0.22μm微孔滤膜，备用； (3)色谱条件：色谱柱为C18色谱柱，采用梯度洗脱，流动相为乙腈-0.2％磷酸水溶液，紫外检测波长为254nm； (4)测定：精密吸取供试品溶液注入超高效液相色谱仪测定，得到UPLC指纹图谱。 6.根据权利要求1所述的厚藤UPLC指纹图谱的建立方法，其特征在于步骤(1)按以下操作进行：精密称定适量绿原酸、咖啡酸、异槲皮苷、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C对照品，加甲醇分别定容于5mL棕色容量瓶，配制成绿原酸3.0080mɡ/mL、咖啡酸2.0960mɡ/mL、异槲皮苷2.0300mɡ/mL、异绿原酸B 3.0400mɡ/mL、异绿原酸A 3.0400mɡ/mL、异绿原酸C3.0480mɡ/mL的标准溶液；精密移取以上标准溶液配制成含绿原酸0.5998mɡ/mL、咖啡酸0.0503mɡ/mL、异槲皮苷0.0698mɡ/mL、异绿原酸B 0.4001mɡ/mL、异绿原酸A 0.8001mɡ/mL、异绿原酸C 0.6005mɡ/mL的混合对照品溶液。 7.根据权利要求1所述的厚藤UPLC指纹图谱的建立方法，其特征在于步骤(3)的色谱条件为：色谱柱：Acquity UPLC BEH C18色谱柱，型号：100mmX2.1mm，1.7μm；流动相：乙腈-0.2％磷酸水溶液；洗脱程序，A为乙腈：0～3min，13％～13％A；3～4min，13％～19％A；4～8min，19％～19％A；8～9min，19％～25％A；9～12min,25％～35％A；12～14min，35％～95％A；流速：0.2ml/min；柱温：35±5℃；检测波长：λ＝254nm；进样量：2μL。 8.根据权利要求1所述的厚藤UPLC指纹图谱的建立方法，其特征在于：所述UPLC指纹图谱共有峰16个，其中六个峰分别为绿原酸、咖啡酸、异槲皮苷、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C的色谱峰。
所属类别：	发明专利