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原文传递一种酶标记的方法及其应用

专利名称：	一种酶标记的方法及其应用
摘要：	本发明提供了一种酶标记的方法及其应用；本发明通过先将酶封闭并活化后冻干处理，再与抗原和/或抗体混合反应，摸索反应pH、组份比例和反应时间等条件，各步骤各条件相互配合，协同增效，短时间内完成酶标记的过程，缩短反应时间，简化反应步骤，具有广阔的应用前景和巨大的市场价值；本发明工艺简单，可实现工业化大规模生产，可为企业带来良好的经济效益，具备广阔的前景。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	上海;31
申请人：	蓝怡科技集团股份有限公司
发明人：	李子樵;胡百敏
专利状态：	有效
申请日期：	2019-05-27T00:00:00+0800
发布日期：	2019-08-09T00:00:00+0800
申请号：	CN201910445426.0
公开号：	CN110108868A
代理机构：	北京品源专利代理有限公司
代理人：	巩克栋
分类号：	G01N33/543(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	201108 上海市闵行区北横沙河路468弄152号
主权项：	1.一种酶标记的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤： (1)向酶中加入封闭剂，封闭反应后进行纯化； (2)向步骤(1)纯化后的酶加入交联剂，活化反应后纯化并冻干保存，得到活化酶的冻干粉； (3)将步骤(3)的活化酶的冻干粉加入助剂溶解，再加入抗原和/或抗体反应。 2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述的酶包括碱性磷酸酶和/或辣根过氧化物酶。 3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述封闭剂包括琥珀酰亚胺酯；优选地，步骤(1)所述封闭剂与酶的摩尔比为(100-10000):1，优选为(200-2000):1。 4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述反应的时间为0.5-4h；优选地，步骤(1)所述反应的温度为35-40℃；优选地，步骤(1)所述反应的缓冲液包括PBS和/或MOPOS；优选地，步骤(1)所述反应的pH为6.5-7.5；优选地，步骤(1)所述纯化的方法包括脱盐柱纯化和/或透析纯化。 5.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其特征在于，步骤(2)所述交联剂包括碳二亚胺和/或羟基琥珀酰亚胺；优选地，所述碳二亚胺与酶的摩尔比为(10-2000):1，优选为(50-1000):1；优选地，所述碳二亚胺与羟基琥珀酰亚胺的摩尔比为(5-1):(1-5)，优选为(2-1):(1-2)。 6.根据权利要求1-5中任一项所述的方法，其特征在于，步骤(2)所述反应的温度为35-40℃；优选地，步骤(2)所述反应的时间为0.5-2h；优选地，步骤(2)所述反应的缓冲液包括MES和/或柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液；优选地，步骤(2)所述反应的pH为4.5-5.5；优选地，步骤(2)所述纯化方法包括脱盐柱纯化和/或透析纯化。 7.根据权利要求1-6中任一项所述的方法，其特征在于，步骤(3)所述助剂的浓度为10-100nM；优选地，步骤(3)所述助剂的pH为6.5-7.5；优选地，步骤(3)所述助剂为PBS和/或MOPSO；优选地，步骤(3)所述活化酶的冻干粉与助剂的料液比为(8-12):1mg/mL。 8.根据权利要求1-7中任一项所述的方法，其特征在于，步骤(3)所述反应的温度为35-40℃；优选地，步骤(3)所述反应的时间为0.5-2h；优选地，步骤(3)所述抗原和/或抗体与活化酶的冻干粉的摩尔比为(4-1):(1-4)。 9.根据权利要求1-8中任一项所述的方法，其特征在于，具体包括如下步骤： (1)向碱性磷酸酶和/或辣根过氧化物酶中加入封闭剂琥珀酰亚胺酯，封闭剂与酶的摩尔比为(100-10000):1，封闭反应，反应的时间为0.5-4h，温度为35-40℃，缓冲液包括PBS和/或MOPOS，pH为6.5-7.5，进行脱盐柱纯化和/或透析纯化； (2)向步骤(1)纯化后的酶加入交联剂碳二亚胺和/或羟基琥珀酰亚胺，碳二亚胺与酶的摩尔比为(10-2000):1碳二亚胺与羟基琥珀酰亚胺的摩尔比为(5-1):(1-5)，活化反应，反应的温度为35-40℃，时间为0.5-2h，缓冲液包括MES和/或柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液，pH为4.5-5.5，脱盐柱纯化和/或透析纯化并冻干保存，得到活化酶的冻干粉； (3)将步骤(3)的活化酶的冻干粉加入助剂溶解，助剂的浓度为10-100nM，pH为6.5-7.5，优选为PBS和/或MOPSO，活化酶的冻干粉与助剂的料液比为(8-12):1mg/mL，再加入抗原和/或抗体反应，抗原和/或抗体与活化酶的冻干粉的摩尔比为(4-1):(1-4)，反应的温度为35-40℃，时间为0.5-2h。 10.一种试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1-9中任一项所述方法制备得到的活化酶的冻干粉和权利要求1-9中任一项所述方法的步骤(3)的助剂。
所属类别：	发明专利