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原文传递疏血通注射液中18种氨基酸的含量测定方法

专利名称：	疏血通注射液中18种氨基酸的含量测定方法
摘要：	本发明实施例提供了一种疏血通注射液中18种氨基酸的含量测定方法，所述18种氨基酸包括：苯丙氨酸，丙氨酸，脯氨酸，甘氨酸，谷氨酸，精氨酸，甲硫氨酸，赖氨酸，亮氨酸，鸟氨酸，γ‑氨基丁酸，色氨酸，丝氨酸，苏氨酸，天冬氨酸，缬氨酸，异亮氨酸，组氨酸；所述方法包括：建立18种氨基酸的标准曲线；获得供试品溶液的提取离子流色谱图；确定供试品中18种氨基酸的含量。本发明实施例提供的疏血通注射液中18种氨基酸的含量测定方法，采用高效液相色谱‑质谱联用(HPLC‑MS/MS)的方法，同时检测疏血通注射液中18种氨基酸的含量，操作简单、灵敏度高、稳定性强、精密度高、重现性好，为疏血通注射液的质量控制提供依据。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	天津;12
申请人：	天津中医药大学
发明人：	何俊;杜宇生;何子龙;贾琪;欧阳慧子;魏娟;常艳旭;李振国;倪开岭;郝明;贾力夫
专利状态：	有效
申请日期：	2019-04-29T00:00:00+0800
发布日期：	2019-08-16T00:00:00+0800
申请号：	CN201910354318.2
公开号：	CN110133124A
代理机构：	北京柏杉松知识产权代理事务所(普通合伙)
代理人：	张函;刘继富
分类号：	G01N30/02(2006.01);G;G01;G01N;G01N30
申请人地址：	300193 天津市南开区鞍山西道312号
主权项：	1.一种疏血通注射液中18种氨基酸的含量测定方法，其特征在于，采用HPLC-MS/MS法，同时测定疏血通注射液中18种氨基酸的含量；所述18种氨基酸包括：苯丙氨酸，丙氨酸，脯氨酸，甘氨酸，谷氨酸，精氨酸，甲硫氨酸，赖氨酸，亮氨酸，鸟氨酸，γ-氨基丁酸，色氨酸，丝氨酸，苏氨酸，天冬氨酸，缬氨酸，异亮氨酸，组氨酸；所述方法包括： (1)建立18种氨基酸的标准曲线；分别精密称取苯丙氨酸，丙氨酸，脯氨酸，甘氨酸，谷氨酸，精氨酸，甲硫氨酸，赖氨酸，亮氨酸，鸟氨酸，γ-氨基丁酸，色氨酸，丝氨酸，苏氨酸，天冬氨酸，缬氨酸，异亮氨酸，组氨酸对照品，用超纯水溶解，制成具有已知浓度的各对照品储备液；由各对照品储备液配制成具有已知浓度的18种氨基酸的混合对照品储备液；用超纯水将所述混合对照品储备液稀释成一系列分别具有不同已知浓度的18种氨基酸的混合对照品溶液；在相同的预设色谱条件和质谱条件下，将体积V1的各浓度的混合对照品溶液分别注入高效液相色谱仪中，获得各浓度混合对照品溶液的提取离子流色谱图；以各混合对照品溶液的提取离子流色谱图中各氨基酸的色谱峰峰面积为纵坐标，以各氨基酸的浓度为横坐标，分别建立各氨基酸的标准曲线； (2)获得供试品溶液的提取离子流色谱图；精密吸取体积V2的疏血通注射液供试品，用超纯水稀释至体积为V3，过滤后制得供试品溶液；在与以上(1)步骤中相同的预设色谱条件和质谱条件下，取体积V1供试品溶液注入高效液相色谱仪中，获得供试品溶液的提取离子流色谱图； (3)确定供试品中18种氨基酸的含量；根据供试品溶液提取离子流色谱图中18种氨基酸各自的色谱峰峰面积，和已建立的各氨基酸的标准曲线，分别读出18种氨基酸各自的浓度C1，并按照下列公式分别计算出供试品中18种氨基酸的含量C； C＝C1×V3/V2。 2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤(1)中，用超纯水将所述混合对照品储备液稀释成5～10个具有不同已知浓度的18种氨基酸的混合对照品溶液，在所得的各混合对照品溶液中，天冬氨酸、甘氨酸的浓度分别为100-20000ng/mL；亮氨酸、缬氨酸的浓度分别为40-8000ng/mL；苯丙氨酸、谷氨酸、赖氨酸、异亮氨酸、丙氨酸的浓度分别为20-4000ng/mL；丝氨酸、苏氨酸的浓度分别为10-2000ng/mL；脯氨酸的浓度为7.5-1500ng/mL；甲硫氨酸、鸟氨酸、γ-氨基丁酸的浓度分别为5-1000ng/mL；色氨酸、精氨酸、组氨酸的浓度分别为2.5-500ng/mL。 3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，V2与V3的比值为1：(50～150)；优选为1：100。 4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述预设的色谱条件包括：色谱柱：采用C18反向硅胶色谱柱；流动相：A相为0.01％-1％甲酸-水，B相为乙腈；梯度洗脱；柱温：35～45℃；流速：0.1～1mL/分钟；进样量：2.5～7.5μL。 5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，流动相中A相为0.05％～0.5％甲酸-水；优选为，流动相中A相为0.1％甲酸-水。 6.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述柱温：40℃；流速：0.5mL/分钟；进样量：5μL。 7.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述梯度洗脱具体为：B相占流动相的体积百分比在下述范围内随着时间的增加而增加，0–8分钟，6％–50％；8–9分钟，50％–95％；9-10分钟，95-95％。 8.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述质谱条件包括：离子化方式：电喷雾离子化；检测模式：多反应离子监测，正离子全扫描模式；毛细管电压：4000V；Delta EMV(+)(增益电压)：400V；干燥气体温度：300-350℃；干燥气体流速：5-15L/min；喷雾气压力：50-60psi。 9.如权利要求8所述的方法，其特征在于，所述质谱条件包括：离子化方式：电喷雾离子化；检测模式：多反应离子监测，正离子全扫描模式；毛细管电压：4000V；Delta EMV(+)(增益电压)：400V；干燥气体温度：320℃；干燥气体流速：10L/min；喷雾气压力：55psi。 10.如权利要求1-9中任一项所述的方法，其特征在于，质谱参数如下：
所属类别：	发明专利