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原文传递一种猪旋毛虫病抗体检测试纸条及其制备方法与应用

专利名称：	一种猪旋毛虫病抗体检测试纸条及其制备方法与应用
摘要：	一种猪旋毛虫病抗体检测试纸条及其制备方法与应用，属于荧光免疫检测技术领域。为了更快速、稳定、准确检测旋毛虫感染，本发明提供了一种猪旋毛虫病抗体检测试纸条，包括样品垫、结合垫、层析膜、吸水垫和底板，所述结合垫上标记有时间分辨荧光微球偶联山羊抗猪IgG；所述层析膜上设有检测线与质控线，其中检测线上喷涂由原核表达的重组肌幼虫期的Ts‑WM5抗原、肠道感染性幼虫的Ts‑WN10抗原、成虫期的Ts‑ZH68抗原和新生幼虫期的Ts‑T668‑C抗原组成的旋毛虫鸡尾酒抗原；所述质控线上喷涂有兔抗山羊IgG，上述各组分组合后制备成试纸条，本发明可用于猪旋毛虫感染的早期快速检测。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	吉林;22
申请人：	吉林大学
发明人：	刘明远;刘晓雷;杨勇;王学林;白雪;唐斌;丁静;王楠;张小波
专利状态：	有效
申请日期：	2019-07-16T00:00:00+0800
发布日期：	2019-09-10T00:00:00+0800
申请号：	CN201910644896.X
公开号：	CN110221067A
代理机构：	哈尔滨市阳光惠远知识产权代理有限公司
代理人：	邓宇
分类号：	G01N33/569(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	130022 吉林省长春市前进大街2699号
主权项：	1.一种猪旋毛虫病抗体检测试纸条，包括样品垫、结合垫、层析膜、吸水垫和底板，其特征在于，所述结合垫上标记有时间分辨荧光微球偶联山羊抗猪IgG；所述样品垫上设置有加样孔；所述层析膜上设有检测线与质控线，其中检测线上喷涂有旋毛虫鸡尾酒抗原，所述旋毛虫鸡尾酒抗原由肌幼虫期的Ts-WM5重组抗原、肠道感染性幼虫的Ts-WN10重组抗原、成虫期的Ts-ZH68重组抗原和新生幼虫期的Ts-T668-C重组抗原组成；所述质控线上喷涂有兔抗山羊IgG。 2.根据权利要求1所述的猪旋毛虫病抗体检测试纸条，其特征在于，所述样品垫材质为玻璃纤维素膜XQ-Y8；所述结合垫材质为玻璃纤维素膜Ahistrom8964；所述层析膜材质为硝酸纤维素膜Millipore135。 3.根据权利要求1所述的猪旋毛虫病抗体检测试纸条，其特征在于，所述旋毛虫鸡尾酒抗原中原核表达的重组肌幼虫期的Ts-WM5抗原、肠道感染性幼虫的Ts-WN10抗原、成虫期的Ts-ZH68抗原和新生幼虫期的Ts-T668-C抗原的浓度比为(0.5-1):(0.5-1)：(0.5-0.75):(0.5-0.75)mg/mL。 4.权利要求1所述的猪旋毛虫病抗体检测试纸条的制备方法，其特征在于，包括如下步骤： 1)旋毛虫鸡尾酒抗原的制备：分别将表达肌幼虫期的Ts-WM5重组蛋白、肠道感染性幼虫的Ts-WN10重组蛋白、成虫期的Ts-ZH68重组蛋白和新生幼虫期的Ts-T668中C端的重组蛋白的各重组质粒转化宿主菌，经诱导表达后，超声破碎菌体，离心收集沉淀，尿素溶解包涵体，然后经亲和纯化分别获得肌幼虫期的Ts-WM5重组抗原、肠道感染性幼虫的Ts-WN10重组抗原、成虫期的Ts-ZH68重组抗原、新生幼虫期的Ts-T668-C重组抗原，将各重组抗原按照浓度比混合后获得旋毛虫鸡尾酒抗原； 2)结合垫的制备：将时间分辨荧光微球偶联山羊抗猪IgG喷涂在结合垫上，真空抽干后干燥保存备用； 3)检测线和质控线的制备：将步骤1)中获得的旋毛虫鸡尾酒抗原与0.5-1mg/mL兔抗山羊IgG分别喷涂在层析膜上，形成检测线与质控线，37℃干燥2-3h，使用封闭剂浸泡干燥后的层析膜1-2h，随后37℃干燥1-2h，密封保存备用；所述旋毛虫鸡尾酒抗原中肌幼虫期的Ts-WM5抗原、肠道感染性幼虫的Ts-WN10抗原、成虫期的Ts-ZH68抗原和新生幼虫期的Ts-T668-C抗原，终浓度分别为0.5-1mg/mL、0.5-1mg/mL、0.5-0.75mg/mL和0.5-0.75mg/mL； 4)试纸条的组装：在底板上沿样品检测时的层析方向依次将样品垫、结合垫、层析垫、吸水垫粘贴在底板上，制成试纸条。 5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤1)所述肌幼虫期的Ts-WM5重组抗原制备时所用的引物如SEQ ID NO.1-SEQ ID NO.2所示；肠道感染性幼虫的Ts-WN10重组抗原制备时所用的引物如SEQ ID NO.3-SEQ ID NO.4所示；成虫期的Ts-ZH68重组抗原制备时所用的引物如SEQ ID NO.5-SEQ ID NO.6所示；新生幼虫期的Ts-T668-C重组抗原制备时所用的引物如SEQ ID NO.7-SEQ ID NO.8所示。 6.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤2)所述喷涂，点样速度为50μL/cm。 7.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤3)所述喷涂，点样速度为1μL/cm。 8.权利要求1所述的猪旋毛虫病抗体检测试纸条在旋毛虫病检测中的应用。 9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，将待测血清用样品稀释液稀释后，加入到试纸条加样孔中，室温静置5～20min，用紫外灯照射试纸条观察结果，待测样品如果质控线和检测线均显色，则判定为阳性；如果仅质控线显色，而检测线不显色，则判定为阴性。
所属类别：	发明专利