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原文传递基于Ts31基因的旋毛虫抗体检测试纸条及其应用

专利名称：	基于Ts31基因的旋毛虫抗体检测试纸条及其应用
摘要：	本发明公开了一种旋毛虫抗体检测试纸条及其制备方法与应用。该检测试纸条中，反应膜上检测区位置包被旋毛虫Ts31重组蛋白，质控区位置包被鸡抗SPA；所述旋毛虫Ts31重组蛋白所述旋毛虫Ts31重组蛋白是使用Ts31基因构建重组表达质粒pET28a‑Ts31，经大肠杆菌表达系统表达纯化获得的。使用本发明所提供的检测试纸条可以快速检测猪血清中的旋毛虫抗体，操作简单，耗时短，敏感性高，特异性好，且产品稳定易保存，便于同时检测大量样本。本发明所提供的旋毛虫抗体检测试纸条在旋毛虫病抗体水平检测、流行病学调查中具有重要的应用价值。
专利类型：	发明专利
申请人：	北京维德维康生物技术有限公司
发明人：	刘河冰;温凯;杨柳;李蓉蓉;马立才
专利状态：	有效
申请日期：	1900-01-20T00:00:00+0805
发布日期：	1900-01-20T03:00:00+0805
申请号：	CN201911388216.9
公开号：	CN110954704A
分类号：	G01N33/68;G01N33/558;C12N15/70;C07K14/435;G;C;G01;C12;C07;G01N;C12N;C07K;G01N33;C12N15;C07K14;G01N33/68;G01N33/558;C12N15/70;C07K14/435
申请人地址：	100095 北京市海淀区地锦路9号院3号楼
主权项：	1.旋毛虫抗体检测试纸条，包括样品吸收垫、胶体金垫、反应膜、吸水垫和背板，所述样品吸收垫上有加样孔；所述胶体金垫上包被有胶体金标记的SPA；所述反应膜上有检测区和质控区，其中检测区包被旋毛虫Ts31重组蛋白，所述旋毛虫Ts31重组蛋白是使用Ts31基因构建重组表达质粒pET28a-Ts31，经大肠杆菌表达系统表达纯化获得的；所述质控区包被鸡抗SPA。 2.权利要求1所诉旋毛虫抗体检测试纸条，样品吸收垫材质为滤血膜；所述胶体金垫材质为玻璃纤维素膜；所述反应膜材质为硝酸纤维素膜；所述吸水垫材质为吸水纸；所述背板为PVC。 3.权利要求1所诉旋毛虫抗体检测试纸条制备方法，包括如下步骤： 1）旋毛虫Ts31重组蛋白的制备：以旋毛虫cDNA文库为模版，针对旋毛虫Ts31基因序列设计特异性引物，通过PCR扩增目的片段并克隆至表达载体pET28a，将成功构建的重组表达质粒pET28a-Ts31转化至大肠杆菌BL21（DE3）中，IPTG诱导表达，经亲和层析和分子筛层析高度纯化后得到Ts31重组蛋白； 2）胶体金垫的制备：将金标记的SPA喷涂在胶体金垫上，真空抽干后干燥保存备用； 3）检测区和质控区的制备：将步骤1）中获得的旋毛虫Ts31重组蛋白稀释为1.0mg/mL的Ts31溶液与1.5mg/mL鸡抗SPA分别喷涂在反应膜上，形成检测线与质控线，37℃干燥16h，密封保存备用； 4）试纸条的组装：在背板上沿试纸条的轴向依次将样品吸收垫、胶体金垫、反应膜、吸水垫粘贴在背板上，制成试纸条。 4.权利要求3所述旋毛虫Ts31重组蛋白制备时所用的引物如序列表的序列1所示，旋毛虫Ts31重组蛋白核酸序列如序列表的序列2所示。 5.权利要求3所述胶体金垫的制备，其特征在于步骤2）所诉喷涂，喷膜量为1.5μL/cm。 6.权利要求3所述检测区和质控区的制备，其特征在于步骤3）所诉喷涂，喷膜量为0.8μL/cm。 7.权利要求1所诉旋毛虫抗体检测试纸条在旋毛虫病检测中的应用。
所属类别：	发明专利