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原文传递一种大脑组织冰冻切片的甲苯胺蓝快速染色方法

专利名称：	一种大脑组织冰冻切片的甲苯胺蓝快速染色方法
摘要：	本发明涉及一种大脑组织冰冻切片的甲苯胺蓝快速染色方法，将处理后的实验动物大脑组织适当修整，以需要的方向摆放至样品托上，利用锡纸将组织包埋成圆柱体，滴入OTC包埋胶，于‑80冰箱快速冷冻；取出冷冻好的组织切片后立即放入AF固定液中固定；水洗：将固定后的冰冻切片放入蒸馏水中洗5～7s；甲苯胺蓝染色：将水洗后的冰冻切片放入预热至50～60的甲苯胺蓝溶液中染色；水洗：将染色后的切片放入蒸馏水中，水洗8～14s，至洗去浮色为止；脱水：切片放入80%酒精脱水1min；分色：将脱水后的切片放入95%的酒精中分色20～30s；脱水：将分色后的切片迅速放入无水酒精中脱水10到20s；透明与封片：将切片放入二甲苯酒精混合液中3～8s后放入纯二甲苯中5～10s后封片。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	河南;41
申请人：	河南城建学院
发明人：	谢朝晖;张程;王莲哲;王艳红;陈东莹
专利状态：	有效
申请日期：	2019-06-05T00:00:00+0800
发布日期：	2019-08-16T00:00:00+0800
申请号：	CN201910486181.6
公开号：	CN110132690A
代理机构：	郑州金成知识产权事务所(普通合伙)
代理人：	白毅明
分类号：	G01N1/30(2006.01);G;G01;G01N;G01N1
申请人地址：	467036 河南省平顶山市新城区龙翔大道
主权项：	1.一种大脑组织冰冻切片的甲苯胺蓝快速染色方法，包括如下步骤： 1）将处理后的实验动物大脑组织适当修整后，以需要的方向摆放至样品托上，利用锡纸将组织包埋成圆柱体，滴入OTC包埋胶，于-80冰箱快速冷冻； 2）取出包埋、冷冻好的组织放于冰冻切片机内切片，片厚7～15μm，贴片后立即放入AF固定液中固定； 3）水洗：将固定后的冰冻切片放入蒸馏水中洗5～7s； 4）甲苯胺蓝染色：将水洗后的冰冻切片放入预热至50～60的甲苯胺蓝溶液中染色2～4min； 5）水洗：将染色后的切片放入蒸馏水中，水洗8～14s，至洗去浮色为止； 6）脱水：切片放入80%酒精脱水1min； 7）分色：将脱水后的切片放入95%的酒精中分色20～30s； 8）脱水：将分色后的切片迅速放入无水酒精中脱水10到20s； 9）透明与封片：将切片放入二甲苯酒精混合液中3～8s后放入纯二甲苯中5～10s后封片。 2.根据权利要求1所述的大脑组织冰冻切片的甲苯胺蓝快速染色方法，其特征在于：甲苯胺蓝染色液浓度为1.5～2.0%，配方为1.5～2.0 g甲苯胺蓝加入100ml蒸馏水中配置而成。 3.根据权利要求1或2所述的大脑组织冰冻切片的甲苯胺蓝快速染色方法，其特征在于：透明与封片过程中，酒精与二甲苯混合溶液由无水酒精和二甲苯按照1：1的比例混合配置而成。 4.根据权利要求3所述的大脑组织冰冻切片的甲苯胺蓝快速染色方法，其特征在于：大脑冰冻切片的前期处理过程包括以下步骤：（1）实验用动物使用3.5的戊巴比妥钠腹腔注射麻醉；（2）在实验用活体一侧颈动脉灌注室温生理盐水，由另一侧静脉输出，至流出液为淡红色或透明为止；（3）灌注完成后取出实验用大脑组织，根据需要进行适当修整。 5.根据权利要求3所述的大脑组织冰冻切片的甲苯胺蓝快速染色方法，其特征在于：所述的AF固定液，由无水酒精和甲醛按照9:1的比例配置而成。 6.根据权利要求1、2、4或5所述的大脑组织冰冻切片的甲苯胺蓝快速染色方法，其特征在于：AF固定液中冰冻切片固定时间为2～4分钟。 7.根据权利要求6所述的大脑组织冰冻切片的甲苯胺蓝快速染色方法，其特征在于：冷冻切片机刀头温度为-19℃～-21℃，冷冻切片机冷冻箱温度为-21℃～-25℃。 8.根据权利要求1、2、4或5所述的鸟类大脑冰冻切片的甲苯胺蓝快速染色方法，其特征在于：冷冻切片机刀头温度为-19℃～-21℃，冷冻切片机冷冻箱温度为-21℃～-25℃。
所属类别：	发明专利