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原文传递一种三联吡啶钌功能化MOF检测降钙素原的电化学发光免疫传感器的制备方法

专利名称：	一种三联吡啶钌功能化MOF检测降钙素原的电化学发光免疫传感器的制备方法
摘要：	本发明涉及一种三联吡啶钌功能化MOF检测降钙素原的电化学发光免疫传感器的制备方法，属于电化学发光传感器领域。本发明以三联吡啶钌功能化的MIL‑101(Al):Ru作为发光体，并以聚乙烯亚胺作为共反应剂，合成了自增强型电化学发光复合物来提高三联吡啶钌ECL信号的强度和稳定性，同时以铜离子功能化四氧化三铁‑聚多巴胺纳米球作为猝灭探针来高效猝灭三联吡啶钌的ECL，实现了在500 fg·mL‑1‑100 ng·mL‑1线性范围内对PCT的灵敏检测，检测限为0.18 pg·mL‑1。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	山东;37
申请人：	济南大学
发明人：	魏琴;王超;鞠熀先;范大伟;匡轩;魏东;张诺;吴丹
专利状态：	有效
申请日期：	2019-05-22T00:00:00+0800
发布日期：	2019-09-10T00:00:00+0800
申请号：	CN201910428824.1
公开号：	CN110220888A
代理机构：	济南誉丰专利代理事务所(普通合伙企业)
代理人：	李茜
分类号：	G01N21/76(2006.01);G;G01;G01N;G01N21
申请人地址：	250022 山东省济南市市中区南辛庄西路336号
主权项：	1.一种三联吡啶钌功能化MOF检测降钙素原的电化学发光免疫传感器的制备方法，其特征在于，电化学发光免疫传感器的制备包括以下步骤：（1）将直径为4 mm的玻碳电极用0.05 μm氧化铝粉打磨抛光至镜面，再用超纯水洗涤干净；（2）将4~8 µL自增强型三联吡啶钌功能化MOF与金纳米粒子的复合物MIL-101(Al):Ru-PEI-Au水溶液滴涂到电极表面，室温保存至干燥；（3）继续滴涂6 μL、浓度为10 μg/mL的降钙素原捕获抗体标准溶液于玻碳电极表面，4ºC冰箱中保存至干燥，超纯水清洗；（4）继续滴涂3 μL、质量分数为1%的牛血清白蛋白溶液，封闭非特异性活性位点，4 ºC冰箱中保存至干燥，超纯水清洗；（5）继续将6 μL、浓度为500 fg/mL～100 ng/mL的一系列不同浓度的降钙素原抗体标准溶液滴涂在电极表面，4 ºC冰箱中保存至干燥，超纯水清洗；（6）将5~10 μL所制得的铜离子功能化四氧化三铁-聚多巴胺纳米球与降钙素原检测抗体的复合物Fe3O4@PDA-CuxO-Ab2水溶液滴涂到电极表面，4 ºC冰箱中保存至干燥，超纯水清洗，即制得检测降钙素原的电化学发光免疫传感器。 2.如权利要求1所述的一种三联吡啶钌功能化MOF检测降钙素原的电化学发光免疫传感器的制备方法，所述自增强型三联吡啶钌功能化MOF与金纳米粒子的复合物MIL-101(Al):Ru-PEI-Au，其特征在于，制备步骤如下：（1）制备三联吡啶钌功能化MOF 将0.1～0.5 mmol氧化铝与0.3～0.7 mmol 2-氨基对苯二甲酸加入到12 mL N，N-二甲基甲酰胺中，搅拌均匀后加入0.02~0.06 mmol三联吡啶钌，磁力搅拌10分钟后转移至反应釜中，100～150 ºC反应72小时，离心后，将沉淀用N，N-二甲基甲酰胺洗涤三次后置于真空干燥箱，60 ºC干燥后得到MIL-101(Al):Ru；（2）制备自增强型三联吡啶钌功能化MOF与金纳米粒子的复合物将5mL，5 mg/mL的MIL-101(Al):Ru水溶液与1 mL含有400 mM 1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐和100 mM N-羟基琥珀酰亚胺的水溶液混合来活化MIL-101(Al):Ru的羧基，然后逐滴滴加0.2~1 mL质量分数为1%的聚乙烯亚胺PEI水溶液，搅拌4小时，离心后分散到10 mL金纳米粒子溶液中，再振荡12小时后得到MIL-101(Al):Ru-PEI-Au。 3.如权利要求1所述的一种三联吡啶钌功能化MOF检测降钙素原的电化学发光免疫传感器的制备方法，所述铜离子功能化四氧化三铁-聚多巴胺纳米球以及降钙素原检测抗体的复合物Fe3O4@PDA-CuxO-Ab2，其特征在于，制备步骤如下：（1）制备四氧化三铁-聚多巴胺纳米球将3～7 mmol三氯化铁分散到40 mL乙二醇中，然后加入44 mmol醋酸钠和1 g聚乙二醇，搅拌30分钟后转移至反应釜中，180～200 ºC反应5～10小时后，通过磁性分离得到四氧化三铁纳米颗粒；将50 mg四氧化三铁纳米颗粒和100 mg盐酸多巴胺分散到60 mL pH为8.5的Tris缓冲液和50 mL异丙醇的混合液中，搅拌36小时后磁性分离得到核-壳结构的Fe3O4@PDA纳米球；（2）制备铜离子功能化四氧化三铁-聚多巴胺纳米球与降钙素原检测抗体的复合物利用PDA的还原和吸附性质，将50 mg四氧化三铁-聚多巴胺纳米球和0.001~0.005 molCuCl2·2H2O溶解到100 mL超纯水中，室温下搅拌8小时，磁性分离后置于真空干燥箱，60 ºC干燥12小时得到Fe3O4@PDA-CuxO；将1 mL，10 mg/mL的Fe3O4@PDA-CuxO与1 mL，10 μg/mL的降钙素原检测抗体混合，4 ºC下孵化12小时得到Fe3O4@PDA-CuxO-Ab2复合物。 4.如权利要求2所述的金纳米粒子溶液，是将1 mL、质量分数为1%的氯金酸溶液稀释到100 mL超纯水中，加入2.5 mL、质量分数为1%的柠檬酸三钠搅拌至沸腾后制得的。 5.如权利要求1所述的500 fg/mL～100 ng/mL的一系列不同浓度的降钙素原抗体标准溶液为从上海领潮生物科技有限公司购得的1 mg/mL的降钙素原溶液用磷酸盐缓冲溶液稀释得到。 6.如权利要求1所述的降钙素原的检测，其特征在于，检测步骤如下：（1）将Ag/AgCl电极作为参比电极、铂丝电极作为对电极、所制得的电化学发光传感器作为工作电极，连接在化学发光检测仪的暗盒中，将电化学工作站和化学发光检测仪连接在一起；（2）化学发光检测仪参数设置为，光电倍增管的高压设置为600 V，扫描速率设置为0.1V/s；（3）电化学工作站参数设置为，循环伏安扫描电位范围为0 V～1.2 V，扫描速率设置为0.1 V/s；（4）以10 mL磷酸盐缓冲溶液作为电解质，通过电化学发光法检测不同浓度的降钙素原抗体产生的电化学发光信号强度；所述磷酸盐缓冲溶液，其pH为7.4，用0.1 mol/L磷酸氢二钠和0.1 mol/L磷酸二氢钾配制；（5）根据所得的电化学发光强度值与降钙素原抗体浓度对数的线性关系，绘制工作曲线。
所属类别：	发明专利