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原文传递一种基于Pd NCs功能化CuInOS检测降钙素原的电化学免疫传感器的制备方法

专利名称：	一种基于Pd NCs功能化CuInOS检测降钙素原的电化学免疫传感器的制备方法
摘要：	本发明涉及一种基于钯纳米立方体（Pd NCs）功能化氧硫铟化铜（CuInOS）纳米复合材料（Pd NCs@CuInOS）检测降钙素原的无标记电化学免疫传感器的制备方法，属于电化学传感器领域。本发明合成了Pd NCs@CuInOS为基底材料，进行传感器的层层修饰。利用Pd NCs功能化CuInOS对过氧化氢良好的催化性能，实现了对标记物的高灵敏检测，同时CuInOS大的比表面积增加了Pd NCs的负载量，进一步增强了电化学信号。本发明对降钙素原检测的线性范围为0.0001~50 ng/mL，检测限为25.8 fg/mL。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	山东;37
申请人：	济南大学
发明人：	贾洪英;鞠熀先;魏琴;刘蕾;范大伟;王欢;吴丹;马洪敏
专利状态：	有效
申请日期：	2019-08-01T00:00:00+0800
发布日期：	2019-11-12T00:00:00+0800
申请号：	CN201910706493.3
公开号：	CN110441535A
代理机构：	济南誉丰专利代理事务所(普通合伙企业)
代理人：	赵凤
分类号：	G01N33/74(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	250022山东省济南市市中区南辛庄西路336号
主权项：	1.一种基于Pd NCs功能化CuInOS检测降钙素原的电化学免疫传感器的制备方法，其特征在于，步骤如下：（1）将直径4 mm 的玻碳电极用三氧化二铝抛光粉抛光处理，乙醇超声清洗，再用超纯水冲洗干净，然后将电极置于5 mmol/L铁氰化钾溶液中，在﹣0.2 ~ 0.6 V电位下扫描，使峰电位差小于110 mV；（2）将6 µL、浓度为0.4 ~ 2.0 mg/mL的Pd NCs功能化CuInOS复合物（Pd NCs@CuInOS）的水溶液滴涂到电极表面，室温保存至干燥；（3）继续滴涂6 µL、浓度为10.0 µg/mL的降钙素原捕获抗体标准溶液于玻碳电极表面，4 ºC冰箱中保存至干燥，超纯水清洗；（4）继续滴涂3 µL、质量分数为1%的牛血清白蛋白溶液至电极表面，封闭非特异性活性位点，4 ºC冰箱中保存至干燥，超纯水清洗；（5）继续滴涂6 µL、0.0001 ~ 50.0 ng/mL不同浓度的降钙素原标准溶液至电极表面，4ºC冰箱中保存至干燥，超纯水清洗，即制得检测降钙素原的无标记电化学免疫传感器。 2.一种基于Pd NCs功能化CuInOS检测降钙素原的电化学免疫传感器的制备方法，所述CuInOS 纳米粒子和Pd NCs以及Pd NCs@CuInOS的制备方法，步骤如下：（1）CuInOS 纳米粒子的制备在磁力搅拌的条件下，4.84 g 三水合硝酸铜和4.42 g 氯化铟加入到500 mL的水溶液中； 1.5 g 硫代乙酰胺加入到上述的500 mL的溶液中； 30 min后，该溶液被加热到90 ℃；接下来再加入0.15 mL肼搅拌2 h 后得到沉淀固体，用去离子水洗涤直至洗涤液的pH为7后再用乙醇清洗数次去除有机物；将所得的固体样品放在真空干燥箱干燥24 h，研磨后得到CuInOS 纳米材料；（2）Pd NCs的制备 Pd NCs是通过将四氯钯酸钠溶液加入到抗环血酸和溴化钾的溶液中制备的；将105 mg的聚乙烯吡咯烷酮，60 mg的抗坏血酸和600 mg的溴化钾溶解在去离子水中,将该溶液用油浴加热到80 ℃，并且保持10 min；然后用滴管加入含四氯钯酸钠（57 mg）的3.0 mL水溶液，并且将这一反应在80 ℃保持3 h，洗涤离心后将其溶解在10 mL的去离子水中；（3）Pd NCs@CuInOS的制备将400 μL的Pd NCs溶液加入到 2 mL的2 mg/mL的CuInOS溶液中，在室温下振荡24 h,离心分离后的产物经多次水洗去除多余的Pd NCs，再分散于去离子水中（2mL）得到Pd NCs@CuInOS溶液。 3.如权利要求1所述的0.0001 ~ 50.0 ng/mL的一系列不同浓度的降钙素原标准溶液为从南京金斯瑞生物科技有限公司购得的1 mg/mL的降钙素原溶液用磷酸盐缓冲溶液稀释得到。 4.如权利要求1所述的制备一种基于Pd NCs功能化CuInOS检测降钙素原的电化学免疫传感器的制备方法，包括如下步骤：（1）使用电化学工作站以三电极体系进行测试，饱和甘汞电极为参比电极，铂丝电极为对电极，一种基于Pd NCs功能化CuInOS检测降钙素原的电化学免疫传感器为工作电极，在10 mL的pH 为4.0～9.0磷酸盐缓冲溶液中测定其电流变化；（2）电化学工作站参数设置为，循环伏安扫描电位为﹣0.5 V，扫描速率设置为0.1 V/s；（3）使用含10 μL浓度为5 mmol/L的过氧化氢的10 mL磷酸盐缓冲溶液，通过计时电流方法检测不同浓度的降钙素原产生的电化学电流信号强度；所述磷酸盐缓冲溶液，其pH为7.4，用0.1 mol/L磷酸氢二钠和0.1 mol/L磷酸二氢钾配制；（4）根据所得电流差值与降钙素原浓度呈线性关系，绘制工作曲线；（5）依据工作曲线的绘制方法进行样品中降钙素原的检测，检测结果从工作曲线中查得。
所属类别：	发明专利