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原文传递一种基于ESR技术检测蛋白中UVA-核黄素体系对多酚氧化的方法

专利名称：	一种基于ESR技术检测蛋白中UVA-核黄素体系对多酚氧化的方法
摘要：	本发明公开了一种基于ESR技术检测蛋白中UVA‑核黄素体系对多酚的氧化的方法，包括以下步骤：取含有核黄素和多酚的蛋白溶液，加入自由基捕获剂a‑(4‑吡啶基‑1‑氧)‑N‑叔丁基硝基酮，自由基捕获剂终浓度为20～60mM；S2、将步骤S1所得混合溶液进行UVA照射；S3、用毛细管吸取UVA照射后的溶液，进行电子自旋共振检测；本发明应用ESR检测蛋白中UVA‑核黄素体系对多酚的氧化后自由基信号的生成，为蛋白氧化过程中产生的自由基信号的检测提供更快速、准确的方法及明确的规范。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	辽宁;21
申请人：	大连工业大学
发明人：	启航;贺宝玉;时逸馨;张英乔;孙一含;申平;蒋迪;董秀萍;姜鹏飞
专利状态：	有效
申请日期：	2019-06-11T00:00:00+0800
发布日期：	2019-09-10T00:00:00+0800
申请号：	CN201910500846.4
公开号：	CN110220933A
代理机构：	大连格智知识产权代理有限公司
代理人：	刘琦
分类号：	G01N24/10(2006.01);G;G01;G01N;G01N24
申请人地址：	116034 辽宁省大连市甘井子区轻工苑1号大连工业大学
主权项：	1.一种基于ESR技术检测蛋白中UVA-核黄素体系对多酚氧化的方法，其特征在于，包括步骤： S1、取含有核黄素和多酚的蛋白溶液，加入自由基捕获剂POBN，得混合溶液A；所述混合溶液A中，POBN浓度为20～60mM；所述自由基捕获剂POBN为a-(4-吡啶基-1-氧)-N-叔丁基硝基酮； S2、将步骤S1所述混合溶液A进行UVA照射，得混合溶液B； S3、用毛细管吸取步骤S2所述混合溶液B，进行电子自旋共振检测；所述电子自旋共振检测的扫描条件为：中心磁场：3460～3490G；扫描宽度：50～100G；频率：9.75GHz；衰减器：10.00～30.00dB；功率：9.50～10.50mW；接收增益：1.00×105～1.00×106；调制频率：100kHz；调制幅度：1.00G；相位调变：0.00deg；偏移量：0.00％；时间常数：3000.00msec～8000.00msec；转换时间：300.00～400.00msec。 2.根据权利要求1所述基于ESR技术检测蛋白中UVA-核黄素体系对多酚氧化的方法，其特征在于，步骤S1所述多酚为海带多酚。 3.根据权利要求1所述基于ESR技术检测蛋白中UVA-核黄素体系对多酚氧化的方法，其特征在于，步骤S1所述含有核黄素和多酚的蛋白溶液为含有核黄素和多酚的肌原纤维蛋白溶液。 4.根据权利要求1所述基于ESR技术检测蛋白中UVA-核黄素体系对多酚氧化的方法，其特征在于，步骤S1所述含有核黄素和多酚的蛋白溶液的制备方法为：取肌原纤维蛋白用pH6、25mM磷酸盐缓冲液溶解，制备成浓度为30～60mg/mL肌原纤维蛋白溶液，加入核黄素和海带多酚，得含有核黄素和多酚的蛋白溶液；其中，以所述肌原纤维蛋白溶液中肌原纤维蛋白的总量计，每克肌原纤维蛋白添加5～150nmol核黄素，每克肌原纤维蛋白添加10～150μmol海带多酚；其中，所述25mM磷酸盐缓冲液中含有0.6M NaCl。 5.根据权利要求1所述基于ESR技术检测蛋白中UVA-核黄素体系对多酚氧化的方法，其特征在于，步骤S2所述UVA照射的时间为0.5～3h，照射强度为5～10W/m2。 6.根据权利要求1所述基于ESR技术检测蛋白中UVA-核黄素体系对多酚氧化的方法，其特征在于，包括步骤： S1、从鲅鱼鱼肉中提取肌原纤维蛋白，用pH6、25mM磷酸盐缓冲液溶解，制备成50mg/mL的肌原纤维蛋白溶液，向所述肌原纤维蛋白溶液中加入核黄素和海带多酚，得含有核黄素和多酚的蛋白溶液；以所述肌原纤维蛋白溶液中肌原纤维蛋白的总量计，每克肌原纤维蛋白添加100nmol核黄素，每克肌原纤维蛋白添加150μmol海带多酚；向所述含有核黄素和多酚的蛋白溶液中加入自由基捕获剂POBN，添加量为60mM，得混合溶液A；其中，所述25mM磷酸盐缓冲液中含有0.6M NaCl； S2、将步骤S1所述混合溶液A在4℃条件下进行UVA紫外照射，照射时间为0.5h，照射强度为10W/m2，得混合溶液B； S3、将步骤S2所述混合溶液B用毛细管吸取进行电子自旋共振检测；电子自旋共振检测的扫描条件为：中心磁场：3470G；扫描宽度：80G；频率：9.75GHz；衰减器：20.00dB；功率：10.04mW；接收增益：1.00×106；调制频率：100kHz；调制幅度：1.00G；相位调变：0.00deg；偏移量：0.00％；时间常数：5242.88msec；转换时间：320.00msec。
所属类别：	发明专利