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原文传递同时检测尿液枸橼酸和草酸含量的液相色谱串联质谱方法

专利名称：	同时检测尿液枸橼酸和草酸含量的液相色谱串联质谱方法
摘要：	本发明提供一种同时检测尿液枸橼酸和草酸含量的液相色谱串联质谱方法，包括制备供试样品和超高效液相色谱‑串联质谱法检测；样本制备采用固相萃取(SPE)方式进行，首先将尿液样本用水进行稀释，然后加入草酸和枸橼酸的同位素标记内标，混合均匀后加入经过活化后的SPE板，然后经过加入氨水的碱性溶液进行洗脱，并在收集后的样本中加入一定浓度的甲酸水溶液，保持其酸性条件，之后将制备完的样本通过色谱仪取样进入色谱质谱系统，通过色谱柱的初步分离；进入质谱中，再根据质谱中产生不同的质荷比检测枸橼酸和草酸。该方法前处理简单，不需衍生、尿样用量较少，可快速、特异的检测尿液草酸和枸橼酸的含量。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	北京;11
申请人：	中国医学科学院北京协和医院
发明人：	禹松林;于佳磊;邱玲
专利状态：	有效
申请日期：	2019-06-06T00:00:00+0800
发布日期：	2019-08-23T00:00:00+0800
申请号：	CN201910490961.8
公开号：	CN110161140A
代理机构：	北京路浩知识产权代理有限公司
代理人：	王文君;陈征
分类号：	G01N30/02(2006.01);G;G01;G01N;G01N30
申请人地址：	100730 北京市东城区帅府园1号
主权项：	1.一种同时检测尿液枸橼酸和草酸含量的液相色谱串联质谱方法，其特征在于，包括制备供试样品和超高效液相色谱-串联质谱法检测；其中，所述制备供试样品的方法包括：取待测尿液样品，加入草酸-13C2作为草酸的内标，枸橼酸-13C6作为枸橼酸的内标；加入2％甲酸水溶液混匀后上弱阳离子交换96孔板，用5％氨水洗脱，收集洗脱液，再加入5％氨水，作为供试样品。 2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述制备供试样品方法包括：取30μL样本或校准品至5mL玻璃管，加入20μL同位素内标，加入1mL2％甲酸水溶液，混合震荡；上样：向弱阳离子交换96孔板的样品孔中上样750μL，用氮气正压缓慢吹下，在加入200μL纯水，用氮气正压吹下；洗脱：向样品孔中加入80μL5％氨水，用氮气正压缓慢吹下，收集洗脱液，加入5μL5％氨水，等待上机测试；所述同位素内标含有：草酸-13C2：浓度为200-1000μmol/L；枸橼酸-13C6：浓度为10-1000μmol/L。 3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述同位素内标含有：草酸-13C2：浓度为500μmol/L；枸橼酸-13C6：浓度为为500μmol/L。 4.根据权利要求1-3任一项所述的方法，其特征在于，色谱条件如下：流动相A：色谱级乙腈；流动相B：含有0.3％甲酸的水溶液；按下表进行梯度洗脱：时间/min ％流动相A ％流动相B 起始 1.0 99 1 1.0 99 2 90 10 3 90 10 4 1.0 99。 5.根据权利要求1-4任一项所述的方法，其特征在于，所用色谱柱为T3色谱柱。 6.根据权利要求1-5任一项所述的方法，其特征在于，色谱条件中流动相流速为0.3ml/min，和/或液相色谱条件中进样量为5μL。 7.根据权利要求1-6任一项所述的方法，其特征在于，质谱条件如下：质谱选择多离子监测反应模式，负离子模式，电喷雾电离，离子源温度300-600℃，具体监测的离子对以及碰撞能量如下： 8.根据权利要求1-7任一项所述的方法，其特征在于，还包括采用稳定同位素标记的草酸-13C2作为草酸的内标；枸橼酸-13C6作为枸橼酸的内标；通过制备一系列不同浓度的标准品，制作标准曲线，以标准溶液浓度为X轴，标准和内标峰面积的比值为Y轴，进行线性回归分析，经“1/X”权重得回归方程；将样品中待测成分与其内标峰面积比代入标准曲线方程，计算尿液样品中各待测成分的浓度。 9.一种用于液相色谱串联质谱方法同时检测尿液枸橼酸和草酸含量的试剂盒，其特征在于，包括：弱阴离子交换96孔板、样本制备液、校准溶液和仪器分析液；其中，样本制备液包括：纯水；浓度为1％～10％甲酸水溶液，优选为2％甲酸水溶液；浓度为1％～20％甲酸水溶液，本试剂优化为10％甲酸水溶液；浓度为0.1％～10％氨水，优选为5％氨水；色谱级甲醇；同位素内标；所述同位素内标含有：草酸-13C2：浓度为200-1000μmol/L；枸橼酸-13C6：浓度为10-1000μmol/L；校准溶液：草酸浓度为：25μmol/L-2000μmol/L；枸橼酸浓度范围为50μmol/L-4000μmol/L；仪器分析液为流动相A：色谱级乙腈；流动相B：含有0.3％甲酸的水溶液。 10.根据权利要求9所述的试剂盒，其特征在于，所述同位素内标含有：草酸-13C2：浓度为500μmol/L；枸橼酸-13C6：浓度为500μmol/L。
所属类别：	发明专利