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原文传递一种检测血液中阿立哌唑和去氢阿立哌唑的方法

专利名称：	一种检测血液中阿立哌唑和去氢阿立哌唑的方法
摘要：	本发明提供了一种检测血液中阿立哌唑和去氢阿立哌唑的方法，包括：利用液相色谱‑质谱联用仪在预设的检测条件下检测至少三种标准溶液，获得各个标准溶液分别对应的第一检测结果，其中，至少三种标准溶液均含有不同浓度的阿立哌唑、去氢阿立哌唑以及相同浓度的内标物；基于第一检测结果、阿立哌唑、去氢阿立哌唑和内标物的浓度，拟合得到标准曲线方程；向待测血液样本中加入一定量的内标物和沉淀蛋白试剂，进行离心处理，取处理后的上清液；利用液相色谱‑质谱联用仪在相同检测条件下检测上清液，获得第二检测结果；基于标准曲线方程和第二检测结果，得到待测血液样本中阿立哌唑的浓度和去氢阿立哌唑的浓度。本方案能够提高血液样本的检测效率。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	北京;11
申请人：	北京和合医学诊断技术股份有限公司
发明人：	邱天祎;雒琴;贾永娟;倪君君
专利状态：	有效
申请日期：	2019-07-12T00:00:00+0800
发布日期：	2019-09-06T00:00:00+0800
申请号：	CN201910630169.8
公开号：	CN110208450A
代理机构：	济南信达专利事务所有限公司
代理人：	李世喆
分类号：	G01N30/89(2006.01);G;G01;G01N;G01N30
申请人地址：	101111 北京市北京经济技术开发区经海六路5号院14号楼1层、2层、3层、5层、6层、7层
主权项：	1.一种检测血液中阿立哌唑和去氢阿立哌唑的方法，其特征在于，包括：制备至少三种标准溶液，其中，所述至少三种标准溶液均含有不同已知浓度的阿立哌唑、不同已知浓度的去氢阿立哌唑和相同已知浓度的内标物；利用液相色谱-质谱联用仪在预设的检测条件下，分别检测每一种所述标准溶液，获得各个所述标准溶液分别对应的第一检测结果；基于各个所述第一检测结果、所述标准溶液中阿立哌唑的浓度和内标物的浓度，分别拟合得到阿立哌唑的标准曲线方程和去氢阿立哌唑的标准曲线方程；向待测血液样本中加入与所述标准溶液中相同量的内标物和沉淀蛋白试剂，并进行高速离心处理，取离心处理后的上清液；利用液相色谱-质谱联用仪在所述检测条件下检测所述上清液，获得所述上清液对应的第二检测结果；基于所述阿立哌唑的标准曲线方程和所述去氢阿立哌唑的标准曲线方程和所述第二检测结果，得到所述待测血液样本中阿立哌唑的浓度和去氢阿立哌唑的浓度。 2.根据权利要求1所述的检测血液中阿立哌唑和去氢阿立哌唑的方法，其特征在于，所述检测条件的色谱条件，包括： C18反向色谱柱；柱温为20～40℃；流动相为：含0.1％甲酸的水溶液，以及含0.1％甲酸和1mM甲酸铵的甲醇溶液，其中，所述水溶液与所述甲醇溶液的体积比为1：9，所述水溶液与所述甲醇溶液的等度洗脱时间不小于2.5min；所述流动相的流速为0.5～0.8ml/min。 3.根据权利要求2所述的检测血液中阿立哌唑和去氢阿立哌唑的方法，其特征在于，所述检测条件的质谱条件，包括：液相色谱-质谱联用仪的质谱检测器为ESI(+)模式；所述离子源参数，包括：气流量为8～50L/min，喷雾量为20～50L/min，气体温度为300～400℃，毛细管电压为3000～5000V。 4.根据权利要求2所述的检测血液中阿立哌唑和去氢阿立哌唑的方法，其特征在于，所述C18反向色谱柱，包括：Agilent Eclipse plus C18。 5.根据权利要求1所述的检测血液中阿立哌唑和去氢阿立哌唑的方法，其特征在于，所述内标物，包括：阿立哌唑-d8。 6.根据权利要求1所述的检测血液中阿立哌唑和去氢阿立哌唑的方法，其特征在于，所述阿立哌唑的标准曲线方程的两个变量分别为：阿立哌唑的色谱峰峰面积与内标物的色谱峰峰面积的比值，以及阿立哌唑的浓度与内标物的浓度的比值；所述去氢阿立哌唑的标准曲线方程的两个变量分别为：去氢阿立哌唑的色谱峰峰面积与内标物的色谱峰峰面积的比值，以及阿立哌唑的浓度与内标物的浓度的比值。 7.根据权利要求1所述的检测血液中阿立哌唑和去氢阿立哌唑的方法，其特征在于，所述制备至少三种标准溶液，包括：制备阿立哌唑标准储备液：用于含水量为0％～30％的甲醇溶液溶解阿立哌唑标准品，得到阿立哌唑标准储备液，并在-80℃条件下保存；制备标曲混合中间液：用稀释液稀释并混合阿立哌唑标准储备液和去氢阿立哌唑标准储备液，得到含有20～2560ng/mL阿立哌唑与去氢阿立哌唑的标曲混合中间液，并在-80℃条件下保存；制备内标工作液：用稀释液稀释并混合内标物储备液，得到含有50～250ng/mL的内标工作液，并在-80℃条件下保存；制备标准溶液：移动至少三种相同体积且不同浓度的标曲混合中间液，向移取的每一种浓度的所述标曲混合中间液内加入相同体积的所述内标工作液和相同体积的所述沉淀蛋白试剂，并在转速为1000～2000rpm下涡旋混匀30s～1min，制成至少三种不同浓度的标准溶液。 8.根据权利要求7所述的检测血液中阿立哌唑和去氢阿立哌唑的方法，其特征在于，在所述向待测血液样本中加入与所述标准溶液中相同量的内标物和沉淀蛋白试剂，并进行高速离心处理之前，进一步包括：将至少2ml的待检测血液在离心速度3000～4000RPM下离心8～15min，并取离心后的上清液作为待测血液样本，在-20℃条件下保存；所述向待测血液样本中加入与所述标准溶液中相同量的内标物和沉淀蛋白试剂，并进行高速离心处理，包括：移取与所述标准溶液中相同量的所述内标工作液，向移取的所述内标工作液中加入所述待测血液样本，在1500～2500RPM的转速下涡旋震荡混合30s～1min，再加入所述沉淀蛋白试剂，在1200～2000RPM的转速下涡旋震荡混合2～4min后，再在10000～15000RPM的转速下高速离心5～10min。 9.根据权利要求7所述的检测血液中阿立哌唑和去氢阿立哌唑的方法，其特征在于，所述稀释液为含水量10％～80％乙腈溶液。 10.根据权利要求1至9中任一所述的检测血液中阿立哌唑和去氢阿立哌唑的方法，其特征在于，所述沉淀蛋白试剂，包括：甲醇，其中，所述待测血液样本与甲醇的体积比为1：3～1：10。
所属类别：	发明专利