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原文传递肺癌尿液分子标志物MDH2在用于肺癌辅助诊断方面的应用

专利名称：	肺癌尿液分子标志物MDH2在用于肺癌辅助诊断方面的应用
摘要：	本发明公开了一种肺癌尿液分子标志物MDH2，主要包括与健康人群相比，MDH2蛋白在一部分女性肺癌患者尿液中高表达，尿液中MDH2蛋白浓度可作为肿瘤分子标志物，结合CT等影像学检查结果，辅助肺癌的诊断。本发明该标志物采用患者的尿液进行检查，无痛无创，方法是用真空抽滤的方式将人的新鲜尿液（20‑40毫升）保存在硝酸纤维素膜上；采用加热（温度55℃）洗脱的方式将硝酸纤维膜上的尿液蛋白洗脱，测定浓度；最后取等量蛋白质用MDH2酶联免疫吸附实验（ELISA）试剂盒检测MDH2浓度。结果显示：MDH2在女性肺癌患者尿液中高表达；使用ELISA的方法可以一次性大批量的检测尿液中MDH2的浓度，可以用于肺癌的辅助诊断。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	天津;12
申请人：	天津市肿瘤医院
发明人：	王长利;张华;潘家强;范真真;张彬;陈良;马宇辰;陈智鹏;刘翠翠;岳东升;沙永生;田鹏飞
专利状态：	有效
申请日期：	2019-07-18T00:00:00+0800
发布日期：	2019-09-06T00:00:00+0800
申请号：	CN201910647881.9
公开号：	CN110208537A
代理机构：	天津市杰盈专利代理有限公司
代理人：	朱红星
分类号：	G01N33/574(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	300060 天津市河西区环湖西路天津市肿瘤医院
主权项：	1.肺癌尿液分子标志物MDH2在用于肺癌辅助诊断方面的应用。 2.权利要求1所述的应用，其检测过程如下：一、用ELISA方法检测不同人群尿液中MDH2的表达通过ELISA的方法检测了36例健康人和44例肺癌患者尿液MDH2的表达，发现MDH2在女性肺癌患者尿液中高表达，肺癌病人共44例，女性23例，其中有9例高表达MDH2；扩大样本量，进一步检测了16例健康人和72例女性肺癌患者中MDH2的表达，有19例女性肺癌患者显著高表达MDH2，证实MDH2是一个新的肺癌尿液蛋白分子标志物，可能用于肺癌的辅助诊断；二、尿液蛋白MDH2的ELISA检测方法 1、尿液蛋白膜上保存：（1）收集患者新鲜晨尿20-40毫升，新鲜尿液4℃ 5000g离心40分钟去除细胞和细胞碎片；（2）取尿液上清液20毫升，加入10毫升磷酸盐缓冲液，混匀；对于蛋白浓度过高的尿液，比如临床检测中1到2个加号的尿液，取尿液上清15毫升，加入7.5毫升磷酸盐缓冲液，混匀；其中尿液：磷酸盐缓冲液的体积比=2:1；（3）根据真空抽滤瓶面积剪裁合适滤纸和孔径0.22微米的硝酸纤维素膜（NC膜），将1层NC膜用水润湿后置于真空抽滤瓶上，连接好真空抽滤装置，下端接离心管收集滤液；（4）将缓冲液平衡好的上清尿液倒入，开启真空抽滤装置使尿液滴下；取下NC膜自然风干，装入真空袋密封后置于-80℃冰箱内保存； 2、NC膜上人尿液蛋白的洗脱方法（1）将吸附尿蛋白质的硝酸纤维膜剪碎置于5 毫升离心管中，依次加入3.4 毫升丙酮，500微升0.5%碳酸氢铵水溶液，将混合物室温强烈振荡20秒，置于55℃干燥箱中加热60分钟，且每隔20分钟停止加热强烈振荡30秒；（2）4℃轻摇2 小时沉淀蛋白，12000转、18 ℃离心15分钟，弃上清，室温放置10 -20分钟，晾干；（3）加入150微升尿液提取缓冲液，吹打后超声3分钟；（4）吸取重溶后的溶液置于新的离心管中12000 rpm、4℃离心15分钟，取上清保存；（5）二辛可宁酸（BCA）法测蛋白浓度； 3、取等量蛋白样品用MDH2 ELISA试剂盒检测；取等量蛋白质（100微克）用Signalway Antibody公司MDH2 ELISA试剂盒检测MDH2浓度，检测方法按照试剂盒说明书。
所属类别：	发明专利