详情

原文传递单分子水平的蛋白质-蛋白质相互作用的测量

专利名称：	单分子水平的蛋白质-蛋白质相互作用的测量
摘要：	提供了用于表征至少一种蛋白质分子与可检测标记的探针的结合特征的方法。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	美国;US
申请人：	生物辐射实验室股份有限公司
发明人：	刘宁
专利状态：	有效
申请日期：	2017-12-19T00:00:00+0800
发布日期：	2019-09-20T00:00:00+0800
申请号：	CN201780084983.3
公开号：	CN110268247A
代理机构：	上海专利商标事务所有限公司
代理人：	陈扬扬;钱文宇
分类号：	G01N21/00(2006.01);G;G01;G01N;G01N21
申请人地址：	美国加利福尼亚州
主权项：	1.一种用于表征至少一种蛋白质分子与可检测标记的探针的结合特征的方法，所述方法包括： a.使蛋白质分子与可检测标记的探针接触，所述探针显示出与蛋白质相关的快速解离速率结合特征，以在蛋白质分子和探针之间产生瞬时结合相互作用； b.通过对多个位置处的标记的探针进行单分子检测来检测瞬时相互作用，其中所述瞬时相互作用具有约10分钟至约1纳秒的观察到的停留时间；并且 c.关联多个位置处的多个瞬时相互作用的相互作用频率，以确定蛋白质分子与探针的结合特征。 2.如权利要求1所述的方法，其中所述蛋白质固定在表面上。 3.如权利要求2所述的方法，其中固定的表面是玻璃、石英或塑料。 4.如权利要求3所述的方法，其中使用亲水性自组装单层，亲水性聚合物刷，两性离子聚合物刷或腈涂层将蛋白质固定在表面上。 5.如权利要求3所述的方法，其中所述表面用链霉亲和素包被，并且所述蛋白质使用生物素化的蛋白质被固定在表面上。 6.如权利要求2所述的方法，其中所述蛋白质以约2个分子至约1×106个分子/100μm2的表面密度固定。 7.如权利要求5所述的方法，其中所述蛋白质以约2×102个分子至约8×105个分子/100μm2的表面密度固定。 8.如权利要求6所述的方法，其中所述蛋白质以约2×103个分子至约6×104个分子/100μm2的表面密度固定。 9.如权利要求1所述的方法，其中使多个位置处的多个瞬时相互作用的相互作用频率相关联允许分离蛋白质特异性信号与非特异性噪音。 10.如权利要求9所述的方法，其中蛋白质特异性信号相互作用与非特异性噪音相互作用的比率大于或约为2。 11.如权利要求10所述的方法，其中蛋白质特异性信号相互作用与非特异性噪音相互作用的比率大于或约为3。 12.如权利要求11所述的方法，其中蛋白质特异性信号相互作用与非特异性噪音相互作用的比率大于或约为4。 13.如权利要求1所述的方法，其中关联多个位置处的多个瞬态相互作用的相互作用频率测量多个位置处的结合和解离事件的总数。 14.如权利要求13所述的方法，其中每个观察区域记录超过1000个瞬时相互作用。 15.如权利要求14所述的方法，其中每个观察区域记录超过2000个瞬时相互作用。 16.如权利要求15所述的方法，其中每个观察区域记录超过4000个瞬时相互作用。 17.如权利要求1所述的方法，其中所述结合特征包括从多个位置处的蛋白质分子和探针之间的多个瞬时相互作用计算的统计度量。 18.如权利要求17所述的方法，其中所述统计度量是由泊松统计，隐马尔可夫建模或边缘检测算法计算的。 19.如权利要求17所述的方法，其中所述统计度量包括以下的一个或多个： a.测定的多个位置处的蛋白质分子与探针的重复结合的停留时间分布的平均值； b.测定的多个位置处的蛋白质分子与探针的重复结合的停留时间分布的中值； c.测定的多个位置处的蛋白质分子与探针的重复结合的停留时间分布的标准偏差； d.测定的多个位置处的蛋白质分子与探针的重复结合的停留时间分布的峰值； e.测定的多个位置处的蛋白质分子与探针的重复结合的停留时间分布的形态； f.测定的多个位置处的蛋白质分子与探针的重复结合的瞬时事件数量分布的平均值； g.测定的多个位置处的蛋白质分子与探针的重复结合的瞬时事件数量分布的中值； h.测定的多个位置处的蛋白质分子与探针的重复结合的瞬时事件数量分布的标准偏差； i.测定的多个位置处的蛋白质分子与探针的重复结合的瞬时事件数量分布的峰值；或 j.测定的多个位置处的蛋白质分子与探针的重复结合的瞬时事件数量分布的形态。
所属类别：	发明专利