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原文传递一种胶体金标记的抗HE4抗体试剂盒及其制备方法

专利名称：	一种胶体金标记的抗HE4抗体试剂盒及其制备方法
摘要：	本发明属于生物学免疫层析检测方法领域，具体涉及一种胶体金标记的抗HE4抗体试剂盒及其制备方法。所述的试剂盒由样品垫、结合垫、反应垫、吸水垫和PVC底板组成；所述的反应垫上有包被有鼠源抗HE4抗体的检测线T以及包被有羊抗鼠IgG的质控线C；通过观察检测线的显色反应即可实现卵巢癌的床旁快速筛查诊断。本发明制备的胶体金免疫层析试剂盒假阳性率低、灵敏快速、稳定性好、结果易判，能够满足卵巢癌标志物HE4的快速筛查需求。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	河南;41
申请人：	河南大学
发明人：	王志增;马远方;周倩文;郑植;王耀辉;顿国庆
专利状态：	有效
申请日期：	2019-07-25T00:00:00+0800
发布日期：	2019-09-24T00:00:00+0800
申请号：	CN201910675948.X
公开号：	CN110275028A
代理机构：	北京力量专利代理事务所(特殊普通合伙)
代理人：	韩慧颖
分类号：	G01N33/68(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	475004 河南省开封市金明区河南大学新校区
主权项：	1.一种快速检测HE4的试剂盒，所述的试剂盒由PVC底板1、样品垫2、结合垫3、反应垫4和吸水垫5组成，所述样品垫2、结合垫3、反应垫4和吸水垫5依次搭接在PVC底板1上，其特征在于：所述的反应垫4上设置有包被有胶体金标记的抗HE4抗体的检测线41、包被有羊抗鼠IgG的质控线42。 2.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述的样品垫1经样品垫处理液处理，所述的样品垫处理液由磷酸盐缓冲液、糖类、牛血清白蛋白、中性盐和表面活性剂组成，余量为水。 3.如权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述的磷酸盐缓冲液的浓度为0.01mol/L，pH为6.0-9.0；所述处理液中的糖类为蔗糖；所述的牛血清白蛋白的体积终浓度为2％；所述的中性盐为氯化钠；所述的表面活性剂选自吐温、Triton X-100、PVP、表面活性剂S7和表面活性剂S9中的一种。 4.如权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述的表面活性剂为吐温或Triton X-100，所述的吐温或Triton X-100质量终浓度为0.1％-2.5％。 5.如权利要求3或4所述的试剂盒，其特征在于，所述的磷酸盐缓冲液的浓度为0.01mol/L，pH为7.2，磷酸盐缓冲液中Na2HPO4·12H2O的质量含量为0.26％，NaH2PO4·2H2O的质量含量为0.044％；所述蔗糖的质量终浓度为3％，所述的氯化钠浓度为300mM，所述的样品垫处理液中所含的表面活性剂为吐温，质量终浓度为0.5％。 6.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述的胶体金与抗HE4抗体偶联的复合物经重悬液悬浮固化于结合垫3上，所述重悬液由磷酸盐缓冲液、惰性蛋白、糖类和吐温组成，所述的磷酸盐缓冲液的浓度为0.01mol/L，pH为6.0-9.0；所述惰性蛋白选自牛血清白蛋白、酪蛋白和鸡卵清白蛋白中的一种；所述糖类选自单糖、双糖或多糖中的一种。 7.如权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述的磷酸盐缓冲液浓度为0.01mol/L，pH为7.2；所述惰性蛋白为牛血清白蛋白，质量终浓度为0.1％-4％；所述糖类为蔗糖和海藻糖；所述的吐温质量终浓度为2％。 8.如权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，所述的磷酸盐缓冲液中，Na2HPO4·12H2O的质量含量为0.26％，NaH2PO4·2H2O的质量含量为0.044％；所述的牛血清白蛋白质量终浓度为1.5％，所述糖类为质量终浓度为3％蔗糖和质量终浓度为3％海藻糖。 9.一种如权利要求1所述的快速检测HE4的试剂盒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤： (1)胶体金的制备取超纯水于锥形瓶中并放入洁净转子，加热至有气泡均匀冒出时，加入1mL1％氯金酸溶液，加热至沸腾后立即加入1mL1.5％柠檬酸三钠，此时锥形瓶中溶液的颜色由灰黑色转变为酒红色，继续加热7min，取下锥形瓶，室温冷却，定容至100mL，密封备用； (2)抗体标记取1mL步骤(1)制备得到的胶体金，加入10μL浓度为0.1mol/L的碳酸钾溶液，调节体系的pH值为8.0；再加入3μL的2mg/mL的Anti-HE4-Ab1，室温混合； (3)封闭向步骤(2)中胶体金标记的Anti-HE4-Ab1中加入牛血清白蛋白溶液，控制牛血清白蛋白的质量终浓度为1％，室温混匀30min； (4)重悬封闭后的胶体金标记抗体离心，弃去上清，沉淀用重悬液重悬；所述重悬液由磷酸盐缓冲液、牛血清白蛋白、蔗糖、海藻糖和吐温组成，余量为水，其中磷酸盐缓冲液浓度为0.01mol/L，pH为7.2；牛血清白蛋白质量终浓度为1.5％，蔗糖质量终浓度为3％，海藻糖质量终浓度为3％，吐温的质量终浓度为2％；磷酸盐缓冲液中，Na2HPO4·12H2O质量含量为0.26％，NaH2PO4·2H2O质量含量为0.044％； (5)制备样品垫把GF-06玻璃纤维膜裁剪成220mm×100mm，浸泡在样品垫处理液中，干燥，取出即得样品垫，放入自封袋中备用；样品垫处理液由磷酸盐缓冲液、蔗糖、氯化钠、牛血清白蛋白和吐温组成，其中，磷酸盐缓冲液的浓度为0.01mol/L，pH为7.2，蔗糖质量终浓度为3％，氯化钠浓度为300mM，牛血清白蛋白的体积终浓度为2％，吐温的质量终浓度为0.5％，磷酸盐缓冲液中Na2HPO4·12H2O的质量含量为0.26％，NaH2PO4·2H2O的质量含量为0.044％，余量为水； (6)制备结合垫将步骤(2)胶体金标记的Anti-HE4-Ab1均匀的铺在GF-06玻璃纤维膜上，干燥，使标记抗体的胶体金粒子固化在玻璃纤维膜上即得结合垫，取出放入密封袋，加入干燥剂，密封保存； (7)制备反应垫将硝酸纤维素膜贴在PVC板上，然后用0.01mol/L，pH为7.2的PBS把Anti-HE4-Ab2稀释至浓度为2mg/mL，作为检测线包被原；把羊抗鼠IgG稀释为1mg/mL，作为质控线C包被原；用喷金划膜仪以1μL/cm划膜，置于37℃鼓风干燥6h即得反应垫，取出放入密封袋，备用； (8)试剂盒组装将结合垫贴在反应垫的前端，再将样品垫贴在结合垫的前端，最后将吸水纸的前端贴在反应垫的后端，另一端贴在PVC板的末端，即完成试剂盒的组装，可得HE4快速检测试剂盒。 10.一种样品垫处理液，其特征在于，所述的样品垫处理液由磷酸盐缓冲液、蔗糖、300mM氯化钠、牛血清白蛋白和吐温组成。
所属类别：	发明专利