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原文传递用于检测禽白血病毒的荧光偏振免疫分析试剂盒及方法

专利名称：	用于检测禽白血病毒的荧光偏振免疫分析试剂盒及方法
摘要：	本发明提供了一种禽白血病的荧光偏振免疫分析检测试剂盒，其包括禽白血病阳性对照、禽白血病阴性对照、荧光素标记的禽白血病重组P27蛋白溶液、样本稀释液、反应微孔板组成。利用该试剂盒，该试剂盒可在15分钟内检测出鸡是否感染禽白血病病毒。本发明提供的检测试剂盒与传统技术相比较，优势明显，技术改进明显，特别是针对禽白血病净化形式复杂、需求旺盛，具有非常广阔的市场前景，可在基层检测和政府监管中发挥重大作用。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	北京;11
申请人：	北京市动物疫病预防控制中心
发明人：	冯小宇;陈会玲;吴佳兴;罗伏兵;杨春江;梅力;赵荣茂;韦海涛;宋彦军;莫勋;魏单平;高晓龙
专利状态：	有效
申请日期：	2019-05-28T00:00:00+0800
发布日期：	2019-09-20T00:00:00+0800
申请号：	CN201910452217.9
公开号：	CN110261607A
代理机构：	北京智为时代知识产权代理事务所(普通合伙)
代理人：	王加岭;杨静
分类号：	G01N33/569(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	102600 北京市大兴区生物医药基地祥瑞大街19号
主权项：	1.一种用于检测禽白血病毒的荧光偏振免疫分析试剂盒，其特征在于，其包括荧光素标记的禽白血病毒重组P27蛋白溶液、样本处理液、阳性对照、阴性对照和反应微孔板，其中，所述阳性对照为灭活的禽白血病病毒JS09株，所述阴性对照为未接病毒的细胞培养上清，所述样本处理液是含禽白血病病毒特异性单克隆抗体的PBST溶液。 2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述荧光素为异硫氰酸荧光素、戊二胺罗丹明或4’-氨甲基荧光素。 3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述禽白血病病毒特异性单克隆抗体的浓度为0.5～5μg/mL，PBST溶液为含体积比为0.05％吐温-20的磷酸盐缓冲液。 4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述荧光素标记优选为异硫氰酸荧光素，浓度为0.5～1.0mg/mL。 5.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述阳性对照为多个，是具有梯度滴度的禽白血病病毒。 6.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述阳性对照为104TCID50含禽白血病病毒JS09株的溶液。 7.一种用于检测禽白血病毒的荧光偏振免疫分析方法，其特征在于，其采用如权利要求1-6中任一项所述的试剂盒进行检测，其包括如下步骤： S1、采集泄殖腔拭子或胎粪或蛋清样本； S2、泄殖腔拭子或胎粪样品或蛋清样本加入到样本稀释液即0.01mol/L pH7.4的PBS溶液中，振荡作为样本溶液； S3、用移液器吸取处理好的样本溶液加入反应微孔中，然后继续加入荧光素标记的禽白血病重组P27蛋白溶液、样本处理液，室温孵育10min；同时做阳性对照和阴性对照；所述阴性对照为采用样本稀释液进行检测； S4、利用荧光偏振免疫分析仪读取荧光偏振信号，根据阴性对照与样本检测的荧光偏振值之差，即ΔFP值确定样本检测结果，样本中病毒含量与荧光偏振值呈负相关关系。 8.根据权利要求7所述的分析方法，其特征在于，在步骤S3中，所述样本溶液加入量为100μL，所述荧光素标记的禽白血病重组P27蛋白溶液为50μL，所述样本处理液50μL。 9.根据权利要求7所述的分析方法，其特征在于，在步骤S4中，ΔFP值大于或等于20mP时判为阳性，ΔFP值小于20mP时判定为阴性。 10.根据权利要求7所述的分析方法，其特征在于，在步骤S2中，泄殖腔拭子或胎粪样品检测时无需稀释，所述蛋清样品在96孔血清稀释板中按1:1的比例用样本稀释液进行稀释。
所属类别：	发明专利