专利名称: |
用于检测禽白血病毒的荧光偏振免疫分析试剂盒及方法 |
摘要: |
本发明提供了一种禽白血病的荧光偏振免疫分析检测试剂盒,其包括禽白血病阳性对照、禽白血病阴性对照、荧光素标记的禽白血病重组P27蛋白溶液、样本稀释液、反应微孔板组成。利用该试剂盒,该试剂盒可在15分钟内检测出鸡是否感染禽白血病病毒。本发明提供的检测试剂盒与传统技术相比较,优势明显,技术改进明显,特别是针对禽白血病净化形式复杂、需求旺盛,具有非常广阔的市场前景,可在基层检测和政府监管中发挥重大作用。 |
专利类型: |
发明专利 |
国家地区组织代码: |
北京;11 |
申请人: |
北京市动物疫病预防控制中心 |
发明人: |
冯小宇;陈会玲;吴佳兴;罗伏兵;杨春江;梅力;赵荣茂;韦海涛;宋彦军;莫勋;魏单平;高晓龙 |
专利状态: |
有效 |
申请日期: |
2019-05-28T00:00:00+0800 |
发布日期: |
2019-09-20T00:00:00+0800 |
申请号: |
CN201910452217.9 |
公开号: |
CN110261607A |
代理机构: |
北京智为时代知识产权代理事务所(普通合伙) |
代理人: |
王加岭;杨静 |
分类号: |
G01N33/569(2006.01);G;G01;G01N;G01N33 |
申请人地址: |
102600 北京市大兴区生物医药基地祥瑞大街19号 |
主权项: |
1.一种用于检测禽白血病毒的荧光偏振免疫分析试剂盒,其特征在于,其包括荧光素标记的禽白血病毒重组P27蛋白溶液、样本处理液、阳性对照、阴性对照和反应微孔板,其中,所述阳性对照为灭活的禽白血病病毒JS09株,所述阴性对照为未接病毒的细胞培养上清,所述样本处理液是含禽白血病病毒特异性单克隆抗体的PBST溶液。 2.根据权利要求1所述的试剂盒,其特征在于,所述荧光素为异硫氰酸荧光素、戊二胺罗丹明或4’-氨甲基荧光素。 3.根据权利要求1所述的试剂盒,其特征在于,所述禽白血病病毒特异性单克隆抗体的浓度为0.5~5μg/mL,PBST溶液为含体积比为0.05%吐温-20的磷酸盐缓冲液。 4.根据权利要求1所述的试剂盒,其特征在于,所述荧光素标记优选为异硫氰酸荧光素,浓度为0.5~1.0mg/mL。 5.根据权利要求1所述的试剂盒,其特征在于,所述阳性对照为多个,是具有梯度滴度的禽白血病病毒。 6.根据权利要求1所述的试剂盒,其特征在于,所述阳性对照为104TCID50含禽白血病病毒JS09株的溶液。 7.一种用于检测禽白血病毒的荧光偏振免疫分析方法,其特征在于,其采用如权利要求1-6中任一项所述的试剂盒进行检测,其包括如下步骤: S1、采集泄殖腔拭子或胎粪或蛋清样本; S2、泄殖腔拭子或胎粪样品或蛋清样本加入到样本稀释液即0.01mol/L pH7.4的PBS溶液中,振荡作为样本溶液; S3、用移液器吸取处理好的样本溶液加入反应微孔中,然后继续加入荧光素标记的禽白血病重组P27蛋白溶液、样本处理液,室温孵育10min;同时做阳性对照和阴性对照;所述阴性对照为采用样本稀释液进行检测; S4、利用荧光偏振免疫分析仪读取荧光偏振信号,根据阴性对照与样本检测的荧光偏振值之差,即ΔFP值确定样本检测结果,样本中病毒含量与荧光偏振值呈负相关关系。 8.根据权利要求7所述的分析方法,其特征在于,在步骤S3中,所述样本溶液加入量为100μL,所述荧光素标记的禽白血病重组P27蛋白溶液为50μL,所述样本处理液50μL。 9.根据权利要求7所述的分析方法,其特征在于,在步骤S4中,ΔFP值大于或等于20mP时判为阳性,ΔFP值小于20mP时判定为阴性。 10.根据权利要求7所述的分析方法,其特征在于,在步骤S2中,泄殖腔拭子或胎粪样品检测时无需稀释,所述蛋清样品在96孔血清稀释板中按1:1的比例用样本稀释液进行稀释。 |
所属类别: |
发明专利 |