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原文传递脑组织中与Mical2相互作用蛋白的鉴定方法

专利名称：	脑组织中与Mical2相互作用蛋白的鉴定方法
摘要：	本发明属于生物工程技术领域，具体涉及一种脑组织中与Mical2相互作用蛋白的鉴定方法。包括如下步骤：构建鼠脑组织mRNA文库；构建含有Mical2基因的融合表达载体，所述Mical2基因的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示；利用酵母双杂交技术，将所述融合表达载体转化到感受态酵母中进行培养，然后与含有所述鼠脑组织mRNA文库的文库酵母进行混合培养；将所述混合培养后的培养液涂板，挑选单克隆菌落，筛选出与Mical2蛋白相互作用的蛋白质。通过该鉴定方法，在鼠脑中发现了125种可以与Mical2相互作用的蛋白质，这为进一步研究Mical2在脑组织中的功能指出了方向。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	广东;44
申请人：	深圳大学
发明人：	李楠;杨玉洁
专利状态：	有效
申请日期：	2019-05-30T00:00:00+0800
发布日期：	2019-10-08T00:00:00+0800
申请号：	CN201910462620.X
公开号：	CN110308279A
代理机构：	深圳市恒申知识产权事务所(普通合伙)
代理人：	袁文英
分类号：	G01N33/68(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	518060 广东省深圳市南山区南海大道3688号
主权项：	1.一种脑组织中与Mical2相互作用蛋白的鉴定方法，其特征在于，包括如下步骤：构建鼠脑组织mRNA文库；构建含有Mical2基因的融合表达载体，所述Mical2基因的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示；利用酵母双杂交技术，将所述融合表达载体转化到感受态酵母中进行培养，然后与含有所述鼠脑组织mRNA文库的文库酵母进行混合培养；将所述混合培养后的培养液涂板，挑选单克隆菌落，筛选出与Mical2蛋白相互作用的蛋白质。 2.如权利要求1所述的脑组织中与Mical2相互作用蛋白的鉴定方法，其特征在于，所述构建鼠脑组织mRNA文库的步骤包括：提取鼠脑组织总RNA，逆转录合成cDNA；将所述逆转录合成的cDNA进行均一化处理，然后将均一化的cDNA插入pGADT7-SfiI载体中得到初始文库；将所述初始文库电转化至感受态细胞HST08中，进行扩增培养。 3.如权利要求2所述的脑组织中与Mical2相互作用蛋白的鉴定方法，其特征在于，在将均一化的cDNA插入pGADT7-SfiI载体中的步骤之后，还包括利用核苷酸序列如SEQ ID No.3和SEQ ID No.4所示的引物进行扩增检测的步骤。 4.如权利要求2所述的脑组织中与Mical2相互作用蛋白的鉴定方法，其特征在于，所述扩增培养后，得到的鼠脑组织mRNA文库质粒浓度为1.0mg/ml。 5.如权利要求1所述的脑组织中与Mical2相互作用蛋白的鉴定方法，含有所述鼠脑组织mRNA文库的文库酵母的制备方法包括：将所述鼠脑组织mRNA文库转化到Y187酵母菌中，涂布SD/-Leu培养基平板，使用含甘油的冻存液刮取菌落，收集菌液。 6.如权利要求5所述的脑组织中与Mical2相互作用蛋白的鉴定方法，其特征在于，所述菌液中，Y187酵母文库浓度大于4.0×107cfu/ml。 7.如权利要求1所述的脑组织中与Mical2相互作用蛋白的鉴定方法，其特征在于，所述混合培养的步骤包括：用YPDA/KAN培养基培养，然后离心弃上清，然后再用YPDA/KAN培养基重悬，涂板于SD/-Trp/-Leu/AbA，培养3-5天。 8.如权利要求1-7任一项所述的脑组织中与Mical2相互作用蛋白的鉴定方法，其特征在于，构建含有Mical2基因的融合表达载体的步骤包括：合成所述Mical2基因，酶切Mical2基因和pGBKT7载体，然后将酶切产物连接得到所述融合表达载体。 9.如权利要求1-7任一项所述的脑组织中与Mical2相互作用蛋白的鉴定方法，所述Mical2蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示。 10.如权利要求1-7任一项所述的脑组织中与Mical2相互作用蛋白的鉴定方法，筛选出与Mical2相互作用的蛋白质的步骤包括：将挑选出的单克隆菌落进行菌落PCR并测序，然后将测序获得的序列在NCBI上进行BLAST对比，从而确定与Mical2相互作用的蛋白质。
所属类别：	发明专利