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P-糖蛋白生物亲和色谱柱的制备方法及其应用
| 专利名称： | P-糖蛋白生物亲和色谱柱的制备方法及其应用 |
| 摘要： | 本发明属于医药技术领域，涉及一种富含P‑糖蛋白生物亲和色谱柱的制备方法及其应用。本发明从Caco‑2细胞中提取富含P‑糖蛋白的质膜，与氨基键合硅胶构建P‑糖蛋白生物亲和色谱柱，将构建的P‑糖蛋白生物亲和色谱柱应用在色谱分析中验证其能与P‑糖蛋白为靶点的药物特异性结合，对P‑糖蛋白阳性药物维拉帕米具有特异性亲和吸附功能，而对非P‑糖蛋白靶点的药物无吸附。为P‑糖蛋白靶点药物的筛选提供了新的方法，本发明制备的P‑糖蛋白生物亲和色谱柱经过性能评价，证明具有很强的专属性、稳定性、使用寿命长，具有良好的应用前景。 |
| 专利类型： | 发明专利 |
| 国家地区组织代码： | 江苏;32 |
| 申请人： | 江苏大学 |
| 发明人： | 童珊珊;陈昱初;余江南;徐希明 |
| 专利状态： | 有效 |
| 申请日期： | 2019-06-28T00:00:00+0800 |
| 发布日期： | 2019-10-08T00:00:00+0800 |
| 申请号： | CN201910575687.4 |
| 公开号： | CN110308233A |
| 分类号： | G01N30/56(2006.01);G;G01;G01N;G01N30 |
| 申请人地址： | 212013 江苏省镇江市 |
| 主权项： | 1.一种P-糖蛋白生物亲和色谱柱的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：提取Caco-2细胞中含有P-糖蛋白的质膜层于透析袋中，透析后得到富含P-糖蛋白的质膜溶液，将质膜溶液与氨基键合硅胶混匀后静置离心，沉淀物加入Tris-HCL溶液混匀后得到的P-糖蛋白质膜固定相混悬液，将P-糖蛋白质膜固定相混悬液注入空白柱芯，装柱完全后得到P-糖蛋白生物亲和色谱柱。 2.根据权利要求1所述的色谱柱的制备方法，其特征在于，所述的质膜层为含有丰富P-糖蛋白的质膜合并层。 3.根据权利要求2所述的色谱柱的制备方法，其特征在于，所述的质膜合并层为在对Caco-2细胞进行质膜提取后通过westernblot方法选择富含P-糖蛋白的质膜层的合并层。 4.根据权利要求1所述的色谱柱的制备方法，其特征在于，所述的质膜溶液与氨基键合硅胶的用量比为0.6mL∶0.6~1.2g。 5.根据权利要求1所述的色谱柱的制备方法，其特征在于，所述装柱完全为检测装柱后流出液时未检出总蛋白和总胆固醇含量。 6.根据权利要求1~5任一项所述的制备方法制备的P-糖蛋白生物亲和色谱柱在筛选P-糖蛋白靶点药物中的应用，其特征在于，所述的应用为以乙酸铵为流动相，色谱柱为P-糖蛋白生物亲和色谱柱，进行高效液相色谱分析，当待测样品中有色谱峰保留说明待测样品中含有P-糖蛋白靶点药物，否则则无。 7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述流动相乙酸铵的浓度为5~15mmol/L。 8.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述高效液相色谱的色谱柱温为37℃，流动相流速为0.2~0.4mL/min。 |
| 所属类别： | 发明专利 |
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