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原文传递一种牛奶中氧四环素残留的比色检测方法

专利名称：	一种牛奶中氧四环素残留的比色检测方法
摘要：	一种牛奶中氧四环素残留的比色检测方法，属于分析化学技术领域。本发明首先将氧四环素适体(APTOTC)与生物素标记的探针CPOTC退火杂交形成双链DNA修饰在链霉亲和素偶联磁珠(SDB)表面；探针SPOTC和HPOTC修饰于金纳米颗粒(AuNPs)表面。当体系中存在氧四环素(OTC)时，OTC与APTOTC的特异性结合并使APTOTC脱离SDB，紧接着CPOTC则与AuNPs修饰的HPOTC杂交形成SDB‑AuNPs体系；AuNPs表面修饰的SPOTC结合SAv‑HRP后可催化TMB‑H2O2溶液变色，利用370nm处紫外吸光度的变化与氧四环素浓度梯度的关系，绘制标准曲线，通过测量待测样品370nm处紫外吸光度，即可实现氧四环素浓度的检测。该方法具有高灵敏度，低成本，快速、易操作等特点，可实现样品中氧四环素的灵敏测定。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	江苏;32
申请人：	南京农业大学
发明人：	许媛媛;苗晋锋;张源淑
专利状态：	有效
申请日期：	2018-03-29T00:00:00+0800
发布日期：	2019-10-11T00:00:00+0800
申请号：	CN201810296904.1
公开号：	CN110320169A
分类号：	G01N21/33(2006.01);G;G01;G01N;G01N21
申请人地址：	210095 江苏省南京市玄武区卫岗1号
主权项：	1.一种牛奶中氧四环素残留的比色检测方法，属于分析化学技术领域。本发明首先将氧四环素适体(APTOTC)与生物素标记的探针CPOTC退火杂交形成双链DNA修饰在链霉亲和素偶联磁珠(SDB)表面，探针SPOTC和HPOTC修饰于金纳米颗粒(AuNPs)表面；当体系中存在氧四环素(OTC)时，OTC与APTOTC的特异性结合并使APTOTC脱离SDB，紧接着CPOTC则与AuNPs修饰的HPOTC杂交形成SDB-AuNPs体系；AuNPs表面修饰的SPOTC结合SAv-HRP后可催化TMB-H2O2溶液变色，利用370nm处紫外吸光度的变化与氧四环素浓度梯度的关系，绘制标准曲线，通过测量待测样品370nm处紫外吸光度，即可实现氧四环素浓度的检测。 2.根据权利要求1所述的一种牛奶中氧四环素残留的比色检测方法，其特征是将氧四环素适体(APTOTC)与生物素标记的探针CPOTC退火杂交形成双链DNA修饰在链霉亲和素偶联磁珠(SDB)表面，将20μL 10μM APTOTC和20μL 10μM CPOTC加入到210μL含0.3M NaCl，pH值为7.0的10mM PBS中，90℃加热2min后缓慢降至室温，之后加入50μL SDB，37℃孵育90min，用pH值为7.0的10mM PBS洗涤3次后，加入500μL 2％BSA室温孵育1h后，将CPOTC/APTOTC修饰好的SDB重悬于50μL pH值为7.0的10mM PBS溶液中。 3.根据权利要求1所述的一种牛奶中氧四环素残留的比色检测方法，其特征是探针SPOTC和HPOTC修饰于金纳米颗粒(AuNPs)表面，将100μL的AuNPs与4μL 10μM的HPOTC、40μL 10μM的SPOTC以及356μL pH值为7.0的10mM PBS混合，37℃孵育1h后，12000rpm，4℃离心20min，用pH值为7.0的10mM PBS重复离心洗涤3次得到HPOTC/SPOTC修饰的AuNPs。 4.根据权利要求1所述的一种牛奶中氧四环素残留的比色检测方法，其特征是当体系中存在氧四环素(OTC)时，OTC与APTOTC的特异性结合并使APTOTC脱离SDB，紧接着CPOTC则与AuNPs修饰的HPOTC杂交形成SDB-AuNPs体系，将上述权利要求2中CPOTC/APTOTC修饰的SDB 4μL、4μL不同浓度的OTC和2μL含0.1M NaCl，pH值为7.4的10mM PBS制成混合液并于37℃孵育1h，用pH值为7.0的10mM PBS洗涤后加入12.5μL上述权利要求3中HPOTC/SPOTC修饰的AuNPs于37℃孵育1h，用100μL pH值为7.0的10mM PBS清洗3次并重悬形成SDB-AuNPs体系。 5.根据权利要求1所述的一种牛奶中氧四环素残留的比色检测方法，其特征是利用370nm处紫外吸光度的变化与氧四环素浓度梯度的关系，绘制标准曲线，通过测量待测样品在370nm处的紫外吸光度，即可实现氧四环素浓度的检测，将上述权利要求4中形成的SDB-AuNPs体系中加入0.5μL SAv-HRP于37℃下孵育1h，用200μL pH值为6.0的10mM PBS清洗5次，加600μL TMB-H2O2溶液重悬于37℃孵育30min观察颜色变化并检测370nm处紫外吸光度。检测一系列标准浓度的氧四环素的紫外吸光度，绘制标准曲线，用人工污染牛奶的方法获得氧四环素的牛奶样品替代上述一系列标准浓度的氧四环素，得到牛奶样品的紫外吸光度，通过标准曲线可计算出实际牛奶中氧四环素的浓度。
所属类别：	发明专利