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原文传递衍生化HPLC-DAD测定利伐沙班基因毒杂质的方法

专利名称：	衍生化HPLC-DAD测定利伐沙班基因毒杂质的方法
摘要：	本发明公开了一种衍生化HPLC‑DAD测定利伐沙班中基因毒性杂质的方法，包括在室温下使用乙腈/甲醇作为衍生化试剂，有机酸作为催化剂，对利伐沙班中基因毒性杂质5‑氯噻吩‑2‑羰基氯进行衍生化。以衍生化产物作为进样样品，基于反相高效液相色谱分离并测定，色谱条件包括：以非极性键合相为固定相，以磷酸盐缓冲液‑乙腈为流动相，使用二极管阵列（DAD）检测器。本发明是基于酰氯类化合物与甲醇发生酯化反应，反应产物稳定且具有较高的紫外吸收波长，从而增强该杂质的可检测性。方法学验证的结果显示该方法专属性和灵敏度良好。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	江苏;32
申请人：	南京科宁检测科技有限公司
发明人：	谢晓燕
专利状态：	有效
申请日期：	2019-08-09T00:00:00+0800
发布日期：	2019-10-11T00:00:00+0800
申请号：	CN201910735016.X
公开号：	CN110320306A
分类号：	G01N30/06(2006.01);G;G01;G01N;G01N30
申请人地址：	210046 江苏省南京市栖霞区纬地路9号29号111,113室
主权项：	1.衍生化HPLC-DAD测定利伐沙班中基因毒性杂质的方法，其特征在于包含以下步骤：（1）在室温下，称取适量的供试品，加入衍生化试剂和催化剂，使利伐沙班中基因毒性杂质5-氯噻吩-2-羰基氯衍生化生成稳定且具有较高紫外吸收波长的甲基-5-氯噻吩-2-羧酸甲酯；（2）利用HPLC-DAD法对步骤（1）中衍生化反应产物甲基-5-氯噻吩-2-羧酸甲酯进行检测，从而实现对利伐沙班基因毒性杂质5-氯噻吩-2-羰基氯的定性及定量。 2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤（1）中的衍生化试剂为乙腈/甲醇溶液，催化剂为有机酸，衍生化反应时间为5~60分钟，供试品浓度为0.5mg/mL~5mg/mL。 3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于衍生化试剂为20:80~40:60的乙腈/甲醇溶液，催化剂为甲酸、乙酸、丙酸、丁酸、乙二酸、丙二酸、丁二酸、酒石酸、苯甲酸、苯乙酸、马来酸，衍生化时间为20~40分钟，供试品浓度为1~3mg/mL。 4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于衍生化试剂为30:70的乙腈/甲醇溶液，催化剂为甲酸、乙酸，衍生化时间为30分钟，供试品浓度为2mg/mL。 5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤（2）中所述的HPLC-DAD法采用反相分配色谱法，以非极性键合相为固定相，采用磷酸盐缓冲液为流动相A，乙腈为流动相B，流动相A与流动相B的比例为40:60，设置流速为0.5~2.0mL/min，柱温为25~45℃，检测波长为274nm。 6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于所述的非极性键合相为十八烷基硅烷键合硅胶、辛烷基硅烷键合硅胶、苯基键合硅胶；磷酸盐为磷酸二氢钾、磷酸二氢铵、磷酸二氢钠、磷酸氢二钾、磷酸氢二钠、磷酸氢二铵以及它们的混合物；磷酸盐缓冲液浓度5mmol/L~30 mmol/L，缓冲液pH值为2.5~3.5；流速为0.8~1.5mL/min，柱温为30~40℃。 7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于所述的非极性键合相为苯基键合硅胶，所述的磷酸盐为磷酸二氢钠，所述的磷酸盐缓冲液浓度10 mmol/L，缓冲液pH值为3.0，所述的流速为1.2mL/min，柱温为30℃。
所属类别：	发明专利