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原文传递一种测定鱼头中肌肽和鹅肌肽含量的高效液相色谱法

专利名称：	一种测定鱼头中肌肽和鹅肌肽含量的高效液相色谱法
摘要：	本发明涉及检测方法技术领域，公开了一种测定鱼头中肌肽和鹅肌肽含量的高效液相色谱法，包括如下步骤：取鱼头部软组织，捣碎后作为试样加入提取液加热提取得粗提液；待粗提液冷却至室温，冷冻离心后取上清液用微孔滤膜过滤；用高效液相色谱测定上述滤液中的肌肽和鹅肌肽的含量，所述高效液相色谱的色谱柱中使用负载铜离子的介孔改性Al‑SBA‑15作为填料。本发明采用负载铜离子的介孔改性Al‑SBA‑15作为高效液相色谱分析时色谱柱中的填料，对肌肽和鹅肌肽的吸附和分离效果好，检测的精确度和灵敏度高，操作简便，无需繁琐的预处理步骤，仅通过简单的预处理即可上机测定同时峰面积和保留时间偏差很小，具有很高的准确性。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	浙江;33
申请人：	浙江海洋大学
发明人：	姜维;李炜男;严小军;刘宇;胡世伟;李世杰;李加亮
专利状态：	有效
申请日期：	2019-07-04T00:00:00+0800
发布日期：	2019-10-18T00:00:00+0800
申请号：	CN201910599463.7
公开号：	CN110346471A
代理机构：	杭州杭诚专利事务所有限公司
代理人：	尉伟敏
分类号：	G01N30/02(2006.01);G;G01;G01N;G01N30
申请人地址：	316100 浙江省舟山市普陀区普陀海洋科技产业园普陀展茅晓辉工业区c2—10地块
主权项：	1.一种测定鱼头中肌肽和鹅肌肽含量的高效液相色谱法，其特征是，包括如下步骤：（1）取鱼头部软组织，捣碎后作为试样加入提取液加热提取得粗提液；（2）待粗提液冷却至室温，冷冻离心后取上清液用微孔滤膜过滤；（3）用高效液相色谱测定上述滤液中的肌肽和鹅肌肽的含量，所述高效液相色谱的色谱柱中使用负载铜离子的介孔改性Al-SBA-15作为填料。 2.根据权利要求1所述的一种测定鱼头中肌肽和鹅肌肽含量的高效液相色谱法，其特征是，步骤（3）中所述负载铜离子的介孔改性Al-SBA-15的制备方法如下： A）将P123和NaF溶解在1-2mol/L的盐酸溶液中，35-45℃下搅拌至完全溶解； B）向上述溶液中逐滴加入氰基乙基三乙氧基硅烷，搅拌20-30min后再逐滴加入正硅酸乙酯，35-45℃下搅拌6-8h； C）向上述溶液中加入1-2mol/L的NaAlO2的盐酸溶液，35-45℃下搅拌20-30h； D）用氨水将溶液pH调节到1.6-1.7后，移入特氟龙内衬反应釜，并将反应釜置于100-200℃烘箱中活化36-48h； E）将反应釜从烘箱中取出，将至室温后用氨水将溶液的pH调节至5.5-6.5，再置于100-200℃烘箱中活化36-48h； F）过滤后将产物用蒸馏水和无水乙醇洗涤后，60-100℃下干燥8-12h，得到氰基化Al-SBA-15； G）将氰基化Al-SBA-15加入到质量分数为44%-47%的硫酸溶液中，90-100℃下搅拌反应24-36h，过滤、洗涤后，70-90℃下干燥8-12h，得到羧基化Al-SBA-15； H）将羧基化Al-SBA-15分散在0.1-0.2mol/L的CuSO4溶液中，搅拌反应20-30h后抽滤，所得产物洗涤后在50-70℃下干燥8-10h； I）将所得产物在马弗炉中500-600℃下焙烧4-5h，得到所述负载铜离子的介孔改性Al-SBA-15。 3.根据权利要求2所述的一种测定鱼头中肌肽和鹅肌肽含量的高效液相色谱法，其特征是，步骤A）-步骤C）中，溶液中NaF、P123、氰基乙基三乙氧基硅烷、正硅酸乙酯、NaAlO2、HCl的质量比为1:（170-180）:（40-45）:（500-550）:（20-50）:（2600-2800）。 4.根据权利要求1所述的一种测定鱼头中肌肽和鹅肌肽含量的高效液相色谱法，其特征是，步骤（1）中所述提取液为蒸馏水、0.1mol/L NaOH溶液、0.6mol/L 盐酸中的一种。 5.根据权利要求1或4所述的一种测定鱼头中肌肽和鹅肌肽含量的高效液相色谱法，其特征是，步骤（1）中加入提取液中的试样质量为（0.8-1.2g）/10mL。 6.根据权利要求1所述的一种测定鱼头中肌肽和鹅肌肽含量的高效液相色谱法，其特征是，步骤（1）中加热提取的温度为75-85℃，提取时间10-20min。 7.根据权利要求1所述的一种测定鱼头中肌肽和鹅肌肽含量的高效液相色谱法，其特征是，步骤（2）中冷冻离心时的温度为0-4℃，时间10-20min，微孔滤膜孔径为0.45μm。 8.根据权利要求1或2所述的一种测定鱼头中肌肽和鹅肌肽含量的高效液相色谱法，其特征是，步骤（3）中采用匀浆法将3.8-4g负载铜离子的介孔改性Al-SBA-15填料装入250mm×4.6mm的不锈钢柱管中得到所述色谱柱，匀浆法中的溶液为正己烷-异丙醇（V:V=90:10），装柱压力为40-50MPa。 9.根据权利要求1或2所述的一种测定鱼头中肌肽和鹅肌肽含量的高效液相色谱法，其特征是，步骤（3）中高效液相色谱法测定时，以pH为8-9的20mmol/L磷酸盐缓冲液和甲醇为流动相，等梯度洗脱，其中甲醇的质量分数为1-5%。 10.根据权利要求1或2所述的一种测定鱼头中肌肽和鹅肌肽含量的高效液相色谱法，其特征是，步骤（3）中高效液相色谱法测定时，使用紫外检测器检测，波长230nm，流速1.0mL/min，柱温35℃。
所属类别：	发明专利