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原文传递一种基于微波酸水解的阴离子交换色谱-脉冲安培法检测血清中单糖含量的检测方法

专利名称：	一种基于微波酸水解的阴离子交换色谱-脉冲安培法检测血清中单糖含量的检测方法
摘要：	本发明提供了一种基于微波酸水解的阴离子交换色谱‑脉冲安培法分析血清中单糖组成的检测方法。本发明涉及使用单模微波蛋白水解仪将血清中的多糖复合物的糖链部分降解为单糖，再应用阴离子交换色谱‑脉冲安培法分析单糖组分。本发明技术方案的优点是：水解过程快速，10分钟快速完成样品处理；一次可降解10个样品；微波酸水解使用传统方法相同的酸且用量少，只需10μL 3 mol/L HCl；并且每次只需2μL的血清；操作步骤简单易学，无需衍生，直接上样。另外，本发明的分析方法具有良好的重复性。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	山东;37
申请人：	青岛大学附属医院
发明人：	张丽娟;何燕利
专利状态：	有效
申请日期：	2018-04-04T00:00:00+0800
发布日期：	2019-10-18T00:00:00+0800
申请号：	CN201810298226.2
公开号：	CN110346500A
代理机构：	青岛合创知识产权代理事务所(普通合伙)
代理人：	王晓晓
分类号：	G01N30/96(2006.01);G;G01;G01N;G01N30
申请人地址：	266000 山东省青岛市市南区江苏路16号
主权项：	1.一种基于微波酸水解的阴离子交换色谱-脉冲安培法检测血清中单糖含量的检测方法，其特征在于：所述检测方法包括以下步骤： (1) 取待测血清至微波水解管，加入水，混匀后再加入HCl或 TFA； (2) 对混合后的样品使用单模微波蛋白水解仪进行微波酸水解； (3) 微波酸水解后的水解液离心浓缩除酸； (4) 离心后的样品中添加甲醇，离心浓缩除残留HCl； (5) 得到的干燥样品用水溶解，离心取上清； (6) 离心后的上清液进行阴离子交换色谱-脉冲安培法分析，得到色谱图； (7) 制备多种单糖的标准曲线； (8) 将步骤(6)得到的色谱图与步骤(7)中单糖的标准曲线比对并分析计算，确定待测血清中的单糖组分。 2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述步骤(1)中待测血清的体积为2-10 μL。 3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述步骤(1)中所用的酸为0.1 mol/L-10 mol/L HCl或0.1 mol/L-4.0 mol/L TFA。 4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述步骤(2)中微波酸水解的条件是：功率80 w -100 w，温度80 ℃-100 ℃，水解时间5 min -15 min。 5.根据权利要求4所述的检测方法，其特征在于：所述步骤(2)中微波酸水解的条件是：功率为100 w，温度为100 ℃，水解时间10 min。 6.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述步骤(6)中的色谱条件为：分析柱：Thermo Scientific Dionex Carbo PACTM PA10, 4.0 mm×250 mm，保护柱：Thermo Scientific Dionex Carbo PACTM PA10, 4.0 mm×50 mm，淋洗液：0-18 min 18 mM NaOH，流速：1.0 mL/min，进样体积：10 μL，柱温：30 ℃。 7.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述步骤(7)中的单糖包括岩藻糖，半乳糖胺，葡萄糖胺，半乳糖，葡萄糖和甘露糖中的至少一种。 8.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述步骤(6)中单糖标准曲线的浓度范围为0.00005 mg/mL -0.05mg/mL。
所属类别：	发明专利