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原文传递一种卡培他滨有关物质的检测方法

专利名称：	一种卡培他滨有关物质的检测方法
摘要：	本发明公开一种卡培他滨有关物质的检测方法：该方法是采用高效液相色谱法进行检测，包括下述步骤：步骤1、配置卡培他滨样品溶液，所述的卡培他滨样品溶液包括卡培他滨供试液和卡培他滨对照液；步骤2、将步骤1所得的样品溶液注入高效液相色谱仪，采用流动相A和流动相B作为流动相进行梯度洗脱，并记录色谱图。所述检测方法采用五氟苯基键合硅胶色谱柱。所述检测方法操作简便，卡培他滨主峰保留时间合适，克服现有技术的缺陷，将杂质D和杂质E进行有效的分离，其他已知杂质均能得到有效检测，分离度高，测定方法专属性强，检测结果准确可信，为卡培他滨的质量控制、杂质研究提供了一种简便合理的检测方法。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	重庆;50
申请人：	重庆圣华曦药业股份有限公司
发明人：	王庆;魏仙
专利状态：	有效
申请日期：	2018-04-24T00:00:00+0800
发布日期：	2019-11-01T00:00:00+0800
申请号：	CN201810374775.3
公开号：	CN110398555A
分类号：	G01N30/06(2006.01);G;G01;G01N;G01N30
申请人地址：	401336 重庆市南岸区江桥路8号
主权项：	1.一种卡培他滨有关物质的检测方法，其特征在于，所述卡培他滨有关物质包括5’-脱氧-5-氟胞苷（杂质A）、5’-脱氧-5-氟尿苷（杂质B）、2’,3’-氧-羰基-5’-脱氧-5-氟-N4-（戊氧基羰基）胞苷（杂质C）、5’-脱氧-5-氟-N4-(2-甲基-1-叔丁氧羰基)胞苷（杂质D）、5’-脱氧-5-氟-N4-(3-甲基-1-叔丁氧羰基)胞苷（杂质E）、2’,3’-二氧-乙酰基-5’-脱氧-5-氟胞苷（杂质F）、[1-[5-脱氧-3-O-（5-脱氧-β-d-核糖）-β-d-核糖]-5-氟-2-氧代-1,2-二氢嘧啶]-氨基甲酸戊酯（杂质G）、[1-[5-脱氧-2-O-（5-脱氧-β-d-核糖）-β-d-核糖]-5-氟-2-氧代-1,2-二氢嘧啶]-氨基甲酸戊酯（杂质H）、[1-[5-脱氧-3-O-（5-脱氧-α-d-核糖）-β-d-核糖]-5-氟-2-氧代-1,2-二氢嘧啶]-氨基甲酸戊酯（杂质I）中的一种或多种，所述检测该方法采用高效液相色谱法进行，包括以下步骤：步骤1、配置卡培他滨样品溶液，所述的卡培他滨样品溶液包括卡培他滨供试品溶液和卡培他滨对照品溶液；步骤2、将步骤1所得的样品溶液注入高效液相色谱仪，采用流动相A和流动相B作为流动相进行梯度洗脱，并记录色谱图；其中所述供试品溶液的制备方法包括下述步骤：精密称取卡培他滨适量，用稀释液溶解并稀释成每1mL含0.3mg的样品，作为供试品溶液；所述对照品溶液的的制备方法包括下述步骤：另取卡培他滨对照品适量，用稀释液溶解并稀释成每1mL含0.15ug的溶液作为对照品溶液；所述高效液相色谱法的色谱柱固定相填充剂为五氟苯基杂化硅胶；其中所述高效液相色谱法的洗脱顺序如下： 0min时流动相为：90~100%流动相A和10~0%的流动相B； 5min时流动相为：90~100%流动相A和10~0%的流动相B； 60min时流动相为：50~55%流动相A和50~45%的流动相B； 61min时流动相为：90~100%流动相A和10~0%的流动相B；所述流动相A为甲醇：乙腈：0.1%酸溶液4：1：15；所述流动相B为甲醇：乙腈：0.1%酸溶液18：1：1。 2.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述高效液相色谱法的色谱柱为Boltimate EXT-PFP，2.7μm 4.6×250mm。 3.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述高效液相色谱法的梯度洗脱顺序如下： 0min时流动相为：98%流动相A和2%的流动相B； 5min时流动相为：98%流动相A和2%的流动相B； 60min时流动相为：52%流动相A和48%的流动相B； 61min时流动相为：98%流动相A和2%的流动相B。 4.如权利要求1 所述的检测方法，其特征在于，所述酸溶液的酸为高氯酸、醋酸或三氟乙酸。 5.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述高效液相色谱法的检测波长为220~280nm。 6.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述高效液相色谱法的色谱柱柱温为35~45℃。 7.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述高效液相色谱法的流速为0.5~1.5mL/min 。 8.如权利要求1 所述的检测方法，其特征在于，所述卡培他滨样品溶液还包括杂质加样溶液；所述杂质加样溶液的制备方法包括下述步骤：分别取5’-脱氧-5-氟胞苷（杂质A）、5’-脱氧-5-氟尿苷（杂质B）、2’,3’-氧-羰基-5’-脱氧-5-氟-N4-（戊氧基羰基）胞苷（杂质C）、5’-脱氧-5-氟-N4-(2-甲基-1-叔丁氧羰基)胞苷（杂质D）、5’-脱氧-5-氟-N4-(3-甲基-1-叔丁氧羰基)胞苷（杂质E）、2’,3’-二氧-乙酰基-5’-脱氧-5-氟胞苷（杂质H）、[1-[5-脱氧-3-O-（5-脱氧-β-d-核糖）-β-d-核糖]-5-氟-2-氧代-1,2-二氢嘧啶]-氨基甲酸戊酯（杂质G）、[1-[5-脱氧-2-O-（5-脱氧-β-d-核糖）-β-d-核糖]-5-氟-2-氧代-1,2-二氢嘧啶]-氨基甲酸戊酯（杂质H）、[1-[5-脱氧-3-O-（5-脱氧-α-d-核糖）-β-d-核糖]-5-氟-2-氧代-1,2-二氢嘧啶]-氨基甲酸戊酯（杂质I）对照品，精密称定，分别用稀释液溶解并稀释至0.10~0.30μg/mL，得到各杂质对照品溶液；取适量的卡培他滨对照液和杂质对照液混合，得到杂质加样溶液。 9.如权利要求8所述的检测方法，其特征在于，所述稀释液为甲醇：乙腈：水4：1：15。 10.如权利要求8所述的检测方法，其特征在于，所述步骤2具体包括如下子步骤：步骤2.1、将所述杂质加样溶液注入液相色谱仪中，记录色谱图，确认分离度，杂质A与杂质B的分离度不小于1.5，杂质E与卡培他滨的分离度不小于2.0；步骤2.2、精密量取所述对照品溶液和所述供试品溶液注入液相色谱仪中，记录色谱图，按主成分外标法以校正后的峰面积计算杂质含量。
所属类别：	发明专利