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原文传递一种二价靶向多肽探针及其制备方法

专利名称：	一种二价靶向多肽探针及其制备方法
摘要：	本发明公开了一种二价靶向多肽探针及其制备方法与应用。该探针包括四个组成部分：A)两个肿瘤特异性靶向多肽；B)两个PEG连接臂；C)骨架核心肽；D)荧光分子；其中，每个所述肿瘤特异性靶向多肽与PEG连接臂通过式I所示的基团相连；所述骨架核心肽其氨基酸序列如下所示：KGGKG；所述骨架核心肽与所述肿瘤特异性靶向多肽是通过PEG连接臂偶联的；所述荧光分子与所述骨架核心肽通过化学键相连。本发明提供的多价靶向多肽探针FITC‑2PEG9‑2AP2H，两个靶向配体AP2H通过PEG链与骨架核心肽偶联，PEG链不仅能提高靶向多肽探针在水溶液中的溶解性，还增加了靶向多肽探针的柔性，有利于与目标物的识别与结合。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	北京;11
申请人：	中国科学院化学研究所
发明人：	赵睿;瑙甘;李永明;金钰龙;黄嫣嫣
专利状态：	有效
申请日期：	2018-05-07T00:00:00+0800
发布日期：	2019-11-15T00:00:00+0800
申请号：	CN201810427152.8
公开号：	CN110456053A
代理机构：	北京纪凯知识产权代理有限公司
代理人：	关畅;赵静
分类号：	G01N33/574(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	100080北京市海淀区中关村北一街2号
主权项：	1.一种二价靶向多肽探针，其结构包括四个组成部分： A)两个肿瘤特异性靶向多肽；B)两个PEG连接臂；C)骨架核心肽；D)荧光分子；其中，每个所述肿瘤特异性靶向多肽与PEG连接臂通过式I所示的基团相连；所述骨架核心肽其氨基酸序列如下所示：KGGKG；所述骨架核心肽与所述肿瘤特异性靶向多肽是通过PEG连接臂偶联的；所述荧光分子与所述骨架核心肽通过化学键相连。 2.根据权利要求1所述的二价靶向多肽探针，其特征在于：所述肿瘤特异性靶向多肽适用于将所述偶联物靶向至肿瘤细胞，并以所述肿瘤细胞表面携带的标志蛋白LAPTM4B作为特异性靶标；所述肿瘤特异性靶向多肽具体为AP2H多肽，其氨基酸序列如下所示：IHGHHIISVG。 3.根据权利要求1或2所述的二价靶向多肽探针，其特征在于：所述PEG连接臂为PEG9；所述荧光分子选自荧光素、罗丹明、尼罗红、萘酰亚胺、菁染料中的至少一种，优选荧光素。 4.根据权利要求1-3中任一项所述的二价靶向多肽探针，其特征在于：所述肿瘤特异性靶向多肽为AP2H，所述二价靶向多肽探针具有下式所示的结构： 5.制备权利要求1-4中任一项所述二价靶向多肽探针的方法，包括下述步骤： 1)采用固相多肽合成法制备骨架核心肽：用FMOC固相多肽合成法在Fmoc-Gly-Wang树脂上由C端开始合成多肽KGGKG，将氨基酸逐个偶联到树脂上，随后在N末端赖氨酸的α氨基与ε氨基上偶联Fmoc-PEG9-CH2-CH2-COOH分子，然后再连接叠氮乙酸，在C末端赖氨酸的ε氨基上偶联FITC，将产物从树脂上裂解下来，得到叠氮修饰的骨架核心肽； 2)采用固相多肽合成法制备肿瘤特异性靶向多肽；然后在固相多肽合成树脂上，通过5-己炔酸原位衍生法在所述肿瘤特异性靶向多肽的氨基端修饰炔基，将产物从树脂上裂解下来，得到炔基修饰的肿瘤特异性靶向多肽； 3)通过液相click反应将步骤1)制备的骨架核心肽与步骤2)制备的肿瘤特异性靶向多肽相连，得到二价靶向多肽探针。 6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：所述步骤1)中，制备骨架核心肽的具体方法如下： a1)以Fmoc-Gly-Wang树脂为起始原料，体积分数20％六氢吡啶/DMF为脱保护试剂，脱去Fmoc保护基；然后加入4倍摩尔量氨基酸Fmoc-Lys(Dde)-OH、HOBt、HBTU，以及活化试剂N-甲基吗啡啉/DMF，进行偶联反应；通过乙酸酐对未反应完全的甘氨酸树脂进行封端；脱去已偶联上的Fmoc-Lys(Dde)-OH中的Fmoc保护基，然后称取4倍摩尔量的Fmoc氨基酸、HOBt和HBTU，依次偶联Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Gly-OH和Fmoc-Lys(Fmoc)-OH； b1)按照每个氨基2倍摩尔量称取Fmoc-PEG9-CH2CH2-COOH、HOBt和HBTU，偶联后脱去Fmoc保护，按照每个氨基4倍摩尔量称取叠氮乙酸、HOBt和HBTU进行固相偶联；随后脱去赖氨酸的Dde保护基；按照每个氨基称取2倍摩尔量的荧光分子、4倍摩尔量的N，N’-二异丙基乙胺，进行偶联反应； c1)利用裂解液将骨架核心肽从树脂上裂解下来，即得；其中所述裂解液由体积分数为95％三氟乙酸，2.5％水，2.5％三异丙基硅烷组成。 7.根据权利要求5或6所述的方法，其特征在于：所述步骤2)中，所述肿瘤特异性靶向多肽为AP2H多肽；所述炔基修饰的肿瘤特异性靶向多肽的制备方法具体如下： a2)以FMOC-Gly-Wang树脂为起始原料，以体积分数20％六氢吡啶/DMF为脱保护试剂，N-甲基吗啡啉和HBTU为活化试剂，合成AP2H多肽序列； b2)脱去所述AP2H多肽序列N端的FMOC保护基团，加入4倍摩尔量的5-己炔酸、HBTU和HOBt进行偶联反应，得到炔基修饰的肿瘤特异性靶向多肽； c2)利用裂解液将炔基修饰的肿瘤特异性靶向多肽从树脂上裂解下来，即得；其中所述裂解液由体积分数为95％三氟乙酸，2.5％水，2.5％三异丙基硅烷组成。 8.根据权利要求5-7中任一项所述的方法，其特征在于：所述步骤3)中，所述Click反应在Cu(I)的催化作用下进行；所述Click反应在溶剂中进行，所述溶剂为二甲基甲酰胺；所述骨架核心肽与所述肿瘤特异性靶向多肽的摩尔比为1:2.4。 9.权利要求1-4中任一项所述的二价靶向多肽探针在下述方面的应用： 1)在制备真核生物肿瘤细胞检测试剂中的应用； 2)在制备治疗肿瘤药物中的应用。 10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于：所述真核生物为哺乳动物；所述肿瘤细胞为癌细胞；所述癌细胞为肝癌细胞、乳腺癌细胞、肺癌细胞、人脑胶质瘤细胞、黑色素癌细胞、胶质母细胞瘤细胞、宫颈癌细胞、鼻咽癌细胞、脑癌细胞、胰腺癌细胞、卵巢癌细胞、子宫癌细胞、睾丸癌细胞、皮肤癌细胞、胃癌细胞、结肠癌细胞、膀胱癌细胞或直肠癌细胞。
所属类别：	发明专利