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原文传递一种血浆中儿茶酚胺代谢物高效液相色谱串联质谱检测方法

专利名称：	一种血浆中儿茶酚胺代谢物高效液相色谱串联质谱检测方法
摘要：	本发明提供了一种血浆中儿茶酚胺代谢物高效液相色谱串联质谱检测方法，包括样品制备、样品处理、样品检测及结果分析步骤，标准品及质控品采用在牛血清白蛋白中加入儿茶酚胺代谢物标准品进行制备，采用弱阳离子交换96孔板进行样品固相萃取，处理样品，处理后的样品进行高效液相色谱质谱检测，本发明检测方法具有灵敏度高、特异性高，受基质影响程度低，单个样本检测时间短，样本用量少，检测成本低等优点。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	浙江;33
申请人：	浙江迪赛思诊断技术有限公司
发明人：	杨兴烨;谭珊;来澜;董伟斌
专利状态：	有效
申请日期：	2019-08-22T00:00:00+0800
发布日期：	2019-11-15T00:00:00+0800
申请号：	CN201910778778.8
公开号：	CN110455954A
代理机构：	杭州天昊专利代理事务所(特殊普通合伙)
代理人：	向庆宁
分类号：	G01N30/02(2006.01);G;G01;G01N;G01N30
申请人地址：	310012浙江省杭州市西湖区三墩镇金蓬街321号2号楼A座、B座1楼
主权项：	1.一种血浆中儿茶酚胺代谢物高效液相色谱串联质谱检测方法，其特征在于，包括如下步骤： (1)样品制备：标准品制备：以牛血清白蛋白作为空白基质，加入儿茶酚胺代谢物标准溶液，配制系列已知浓度的儿茶酚胺代谢物标准品；质控品制备：以牛血清白蛋白作为空白基质，加入儿茶酚胺代谢物标准溶液，配制低、中、高三个已知浓度的儿茶酚胺代谢物质控样品； (2)样品处理：样品包括待测人血浆样品、标准品、质控品，处理方法均如下： A)预处理：取500μL样品，加入15μL内标液，涡旋混匀，再加入50mM乙酸铵溶液500μL，涡旋混匀； B)固相萃取处理：将步骤A)中预处理样品转移入经过活化平衡的弱阳离子交换96孔板中，静置5分钟后，加入平衡淋洗液1mL，负压或正压至干；再加入1mL甲醇，负压或正压至干；最后分2次分别加入250mL洗脱液，在负压或正压下收集到96孔收集板中，用氮气吹干； C)样品复溶：将100μL复溶液加入到步骤B)经氮气吹干后的96孔收集板中，加覆96孔板封膜，涡旋至少5分钟使残渣充分溶解，在4000rpm下离心5min后待测； (3)样品检测：取步骤(2)处理后得到的样品10～40μL，自动进样，进行高效液相色谱串联质谱检测； (4)数据处理及分析：建立标准曲线并计算待测人血浆样品儿茶酚胺代谢物浓度。 2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述儿茶酚胺代谢物为甲氧基肾上腺素和/或甲氧基去甲肾上腺素。 3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，甲氧基肾上腺素在标准品中的系列浓度为10pg/mL、20pg/mL、50pg/mL、100pg/mL、150pg/mL、200pg/mL、250pg/mL、500pg/mL、600pg/mL；甲氧基去甲肾上腺素中的系列浓度为20pg/mL、40pg/mL、100pg/mL、200pg/mL、300pg/mL、400pg/mL、500pg/mL、1000pg/mL、1200pg/mL。 4.如权利要求2所述的方法，其特征在于，甲氧基肾上腺素质控品低、中、高浓度分别为30pg/mL、120pg/mL、300pg/mL；甲氧基去甲肾上腺素质控品低、中、高浓度分别为60pg/mL、240pg/mL、600pg/mL。 5.如权利要求2所述的方法，其特征在于，甲氧基肾上腺素内标采用氘代甲氧基肾上腺素；甲氧基去甲肾上腺素内标采用氘代甲氧基去甲肾上腺素。 6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述经过活化平衡的弱阳离子交换96孔板的活化平衡方法为：加入1mL甲醇，静置5分钟，再加入1mL超纯水静置5分钟。 7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述平衡淋洗液为50mM乙酸铵溶液，pH＝7；所述洗脱液为含5％甲酸甲醇；所述复溶液为含0.1％甲酸的10％甲醇水溶液。 8.如权利要求1所述的方法，其特征在于，液相色谱条件：采用梯度洗脱反相色谱法，流动相A为0.1％甲酸-5mM甲酸铵水溶液，流动相B为0.1％甲酸甲醇溶液，色谱柱为五氟苯基柱(PFP)，流动相流速为0.6mL/min，柱温在40℃。 9.如权利要求8所述的方法，其特征在于，所述梯度洗脱程序为：时间(min) 0 0.5 2.15 2.20 2.60 2.65 3.0 3.5 ％B 10 10 65 90 90 10 10 10 10.如权利要求1所述的方法，其特征在于，质谱条件为：采用电喷雾离子源(ESI)和正离子多反应监测扫描模式(MRM)，用于检测的MN和NMN及其内标的母离子/子离子对质荷比(m/z)如下所示：MN，180.1/148.1和180.1/120.1；NMN，166.1/134.1和166.1/121.1，MN内标183.1/151.1，NMN内标169.1/137.1。
所属类别：	发明专利