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一种基于DNA步行器诱导构象转化和信号放大的电化学发光传感器及其应用
| 专利名称： | 一种基于DNA步行器诱导构象转化和信号放大的电化学发光传感器及其应用 |
| 摘要： | 本发明公开了一种基于DNA步行器诱导构象转化和信号放大的电化学发光传感器及其检测谷胱甘肽(GSH)的分析应用。本发明的技术方案是通过目标GSH将MnO2还原成替代目标Mn2+,Mn2+驱动DNA酶放大反应产生DNA产物。DNA产物驱动电极上内切酶辅助的DNA步行器放大反应，进一步诱导构象转换形成亲和素适体，该适体特异性结合CdS:Mn‑亲和素信号探针，构建了ECL传感器检测GSH。该研究思路为实现GSH的灵敏检测提供了新的策略。 |
| 专利类型： | 发明专利 |
| 国家地区组织代码： | 山东;37 |
| 申请人： | 青岛科技大学 |
| 发明人： | 接贵芬;葛君君 |
| 专利状态： | 有效 |
| 申请日期： | 2019-08-20T00:00:00+0800 |
| 发布日期： | 2019-11-19T00:00:00+0800 |
| 申请号： | CN201910768745.5 |
| 公开号： | CN110470714A |
| 代理机构： | 青岛中天汇智知识产权代理有限公司 |
| 代理人： | 郝团代 |
| 分类号： | G01N27/327(2006.01);G;G01;G01N;G01N27 |
| 申请人地址： | 266000 山东省青岛市崂山区松岭路99号 |
| 主权项： | 1.一种基于DNA步行器诱导构象转化和信号放大的电化学发光传感器，其特征是：利用亲和素标记CdS:Mn量子点构建ECL信号探针，通过目标GSH将MnO2还原生成的Mn2+催化DNA酶循环放大反应，产生DNA产物。DNA产物驱动电极上内切酶辅助的DNA步行器诱导构象转换，结合CdS:Mn-亲和素信号探针，构建了ECL传感器。 2.一种制备权利要求1所述的基于DNA步行器诱导构象转化和信号放大的电化学发光传感器的方法和应用，其特征方法由下列步骤组成： 步骤1.CdS:Mn-亲和素信号探针的合成： 取100微升CdS:Mn QDs，加入10μL 0.1M EDC和10μL 0.025M NHS活化1小时，加入20μL1mg/mL亲和素SA于37℃反应6h。 步骤2.GSH将MnO2还原成Mn2+： 20μL 不同浓度的GSH与20μL MnO2纳米片混合涡旋3min,离心5min，取上清液得到不同浓度Mn2+的溶液。 步骤3.Mn2+催化的DNA酶循环放大反应： 20mg EDC和10mg NHS加入到50μL的COOH-MB溶液中，37℃下活化1h，加入50μL S1(1μM)37℃反应6h，再加入25μL S2(1μM)反应2h形成DNA酶。磁分离去除多余的DNA，分散到170μLPBS。最后，取5μL上述Mn2+的溶液与20μL MB-S1-S2溶液混合后于37℃反应80min。磁分离后，收集上清液备用。 步骤4.传感器的构建和检测。 ITO电极清洗晾干。Arm和Blocker(A/B)于37℃下反应2h保护Arm，然后6μL退火的H1和A/B按比例混合滴到纳米金修饰的ITO电极，37℃反应过夜,用1mM MCH封板2h。电极冲洗后，6μL步骤3收集的上清液和2U Nt.BbvCI加入电极反应体系中于37℃反应2h。最后与CdS:Mn-SA探针于37℃反应1h。 3.根据权利要求2所述的谷胱甘肽GSH的检测方法，其特征是：所述的电化学发光测试是将表面进行反应完成的电极作为工作电极，三电极体系中检测ECL信号。于100mM PBS(pH7.4，含有50mM K2S2O8)进行ECL检测，PMT是-800V，电位：0～-1.5V，扫速：100mV s-1。 |
| 所属类别： | 发明专利 |
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