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原文传递一种隐孢子虫和贾第鞭毛虫联合检测试剂及其制备方法

专利名称：	一种隐孢子虫和贾第鞭毛虫联合检测试剂及其制备方法
摘要：	本发明公开了一种隐孢子虫和贾第鞭毛虫联合检测试剂及其制备方法，包括PVC底板，所述PVC底板的顶部从左到右依次设置有样品垫、胶体金标记垫、硝酸纤维素膜检测垫和吸水垫。本发明通过对导致人体腹泻的最主要的两种水源性寄生虫(隐孢子虫和贾第鞭毛虫)的检测，一次加样，可以同时获得两个结果，不仅提高检出率，同时也对病因进行了鉴别，且其灵敏度高、特异性强、速度快(5‑10min)、操作简便、重复性好、结构稳定、使用性能好，适用于临床检测或普查等多种场合，供外出期间或在外住宿或就餐后存在低烧或腹泻病人快速筛查，确认是何种原因导致的腹泻，可以对治疗和用药给出诊断依据。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	广东;44
申请人：	珠海市医友生物科技有限公司
发明人：	郭勇华;刘现杰
专利状态：	有效
申请日期：	2019-08-06T00:00:00+0800
发布日期：	2019-11-15T00:00:00+0800
申请号：	CN201910720351.2
公开号：	CN110456040A
代理机构：	北京华际知识产权代理有限公司
代理人：	范登峰
分类号：	G01N33/53(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	519000广东省珠海市高新区唐家湾镇金鼎金峰西路24号4栋三层4301
主权项：	1.一种隐孢子虫和贾第鞭毛虫联合检测试剂，包括PVC底板(1)，其特征在于：所述PVC底板(1)的顶部从左到右依次设置有样品垫(2)、胶体金标记垫(3)、硝酸纤维素膜检测垫(4)和吸水垫(6)，且硝酸纤维素膜检测垫(4)的内表面从左到右依次设置有隐孢子虫检测线(8)、贾第鞭毛虫检测线(7)和质控线(5)，所述胶体金标记垫(3)的左侧位于样品垫(2)的内侧，且硝酸纤维素膜检测垫(4)的左侧位于胶体金标记垫(3)的内侧，硝酸纤维素膜检测垫(4)的右侧位于吸水垫(6)的内侧。 2.根据权利要求1所述的一种隐孢子虫和贾第鞭毛虫联合检测试剂，其特征在于：所述胶体金标记垫(3)的材质为聚酯膜，样品垫(2)材质为聚酯膜或玻璃纤维素膜。 3.一种隐孢子虫和贾第鞭毛虫联合检测试剂的制备方法，其特征在于：其制备方法包括以下步骤： A、制备样品垫(2)：将样品垫(2)置于处理液中浸泡，然后将含有处理液的样品垫(2)置于温度为18-24℃、相对湿度小于40％的环境中烘干16-24h，备用； B、制备胶体金标记垫(3)：胶体金溶液、抗体标记及胶体金标记垫(3)制备； C、制备硝酸纤维素膜检测垫(4)：①、按照配方要求配置好质控线(5)、隐孢子虫检测线(8)和贾第鞭毛虫检测线(7)的抗体溶液，且最终抗体溶液浓度为1.0-1.2mg/ml；②取硝酸纤维素膜(规格宽度25mm)，按照距离间隔一次性划出隐孢子虫检测线(8)、贾第鞭毛虫检测线(7)和质控线(5)，划膜时，抗体溶液的消耗量设定为1.0-1.2ul/cm，隐孢子虫检测线(8)包被有鼠抗隐孢子虫单克隆抗体3，贾第鞭毛虫检测线(7)包被有鼠抗贾第鞭毛虫单克隆抗体4，质控线(5)包被有羊抗鼠IgG多克隆抗体； D、贴板及切割：将样品垫(2)、胶体金标记垫(3)、硝酸纤维素膜检测垫(4)和吸水垫(6)顺序搭接PVC底板(1)上，并按照规格要求切割成宽度3.3mm(条型)和4mm(卡型)。 4.根据权利要求3所述的一种隐孢子虫和贾第鞭毛虫联合检测试剂的制备方法，其特征在于：所述步骤A中，处理液为样品垫处理液，且处理液由0.5％吐温-20、1％BSA的pH为8.0的1mol/L磷酸盐缓冲液或Tris-HCl缓冲液组成。 5.根据权利要求3所述的一种隐孢子虫和贾第鞭毛虫联合检测试剂的制备方法，其特征在于：所述步骤B中，胶体金溶液的制备方法(以制备1000ml为例)包括以下步骤：①、用量筒量取980mL工艺用水到烧瓶中；②、加入制备量1％氯化金溶液，边搅拌边加热至沸腾；③、在搅拌过程中，迅速加入制备量1％柠檬酸三钠溶液；④、颜色变成橙红色后，继续煮沸15min；⑤、关闭搅拌器，让胶体金溶液自然冷却，用工艺用水将胶体金溶液定容至1000mL。 6.根据权利要求3所述的一种隐孢子虫和贾第鞭毛虫联合检测试剂的制备方法，其特征在于：所述步骤B中，抗体标记及胶体金标记垫(3)的制备方法(以制备40米胶体金标记垫(3)为例)包括以下步骤：①、最佳pH值的确定：取320ml胶体金溶液，取用0.1M的碳酸钾溶液调整胶体金溶液的pH值至合适pH值；②、将溶液放到磁力搅拌器上，调整转速为250rpm；③搅拌状态下，加入所需量鼠抗隐孢子虫单克隆抗体1和鼠抗贾第鞭毛虫单克隆抗体2，这两种抗体在此溶液中的浓度控制在8-10ug/ml；④、静置15min后加入10％BSA，使BSA终浓度为0.1％，加入0.32ml的1％PEG20000，继续搅拌10min；⑤、离心：将标记好的溶液转移到离心管中，天平上调整平衡，并控制温度为2-8℃，转速为10000rpm，离心时间为30min；⑥、小心吸出上清，收集沉淀，用金标结合物稀释液定容到原胶体金溶液体积的10％；⑦、涂布：取聚酯无纺布，设定涂布量为6-8ul/cm，干燥温度为37℃，相对湿度≤40％，转动速度1.5m/min，将涂布好的胶体金标记垫(3)转移到干燥间；⑧、干燥温度为37℃，干燥湿度≤40％，干燥时间为16-24h；⑨、胶体金标记垫(3)干燥后，用铝箔袋封存备用。 7.根据权利要求3所述的一种隐孢子虫和贾第鞭毛虫联合检测试剂的制备方法，其特征在于：所述步骤B中的胶体金标记垫(3)制备完成后，在其表面上标记有鼠抗隐孢子虫单克隆抗体1和鼠抗贾第鞭毛虫单克隆抗体2。 8.根据权利要求3所述的一种隐孢子虫和贾第鞭毛虫联合检测试剂的制备方法，其特征在于：所述步骤C中还包括③、距离间隔设定：隐孢子虫检测线(8)离硝酸纤维素膜检测垫(4)的底端距离为7mm，贾第鞭毛虫检测线(7)离硝酸纤维素膜检测垫(4)的底端距离为12mm，质控线(5)离硝酸纤维素膜检测垫(4)的底端距离为17mm；④、设定干燥温度为37℃，相对湿度≤40％的环境下干燥，干燥时间为16-24h；⑤、包被好的硝酸纤维素膜检测垫(4)经干燥塔干燥后，卷好备用。 9.根据权利要求3所述的一种隐孢子虫和贾第鞭毛虫联合检测试剂的制备方法，其特征在于：所述步骤D中还包括①、检查内包间温湿度，确保温度为18-24℃，湿度≤40％才能开始工作；②、在台面上展开PVC底板(1)，两端粘在操作台上，撕掉中间部分宽度为25mm的离层纸；③、将硝酸纤维素膜检测垫(4)对准直线贴在撕开离层纸的地方；④、再撕开PVC底板(1)下边的保护纸，将胶体金标记垫(3)黏贴在PVC底板(1)上，让胶体金标记垫(3)的上边缘与硝酸纤维素膜检测垫(4)的下边缘重叠1-2mm，将样品垫(2)粘贴在胶体金标记垫(3)的下方，让样品垫(2)的上边缘与胶体金标记垫(3)的下边缘重叠1-2mm；⑤、撕开PVC底板(1)上边的离层纸，将吸水垫(6)直线黏贴到PVC底板(1)上，让吸水垫(6)与硝酸纤维素膜检测垫(4)的上边缘重叠2mm左右；⑥、贴透明胶带，让透明胶带完全覆盖胶体金标记垫(3)；⑦、操作自动斩切机，按要求的宽度切割。
所属类别：	发明专利