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原文传递一种丙烯酰胺电化学快速检测方法

专利名称：	一种丙烯酰胺电化学快速检测方法
摘要：	本发明公开一种丙烯酰胺电化学快速检测方法，包括以下步骤：1)修饰电极的制备，在石墨电极表面加入壳聚糖、羧基化碳纳米管后电化学沉积纳米金颗粒；2)往修饰电极加入丙烯酰胺多克隆抗体孵育一段时间、用缓冲液冲洗后，使用酪蛋白封闭未结合的活性位点；3)将待测的丙烯酰胺经巯基丙酸衍生后的产物丙烯酰胺‑巯基丙酸滴加到修饰电极中孵育一段时间，用缓冲液冲洗；4)将修饰电极与铂电极、Ag/AgCl参比电极组成三电极体系，丙烯酰胺‑巯基丙酸会引起体系电流变化，将电流变化值与标准曲线进行对比确定丙烯酰胺‑巯基丙酸的浓度，进而确定丙烯酰胺的浓度。本发明具有快速、准确、高灵敏的特点。本发明还公开一种丙烯酰胺多克隆抗体的制备方法。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	广东;44
申请人：	佛山职业技术学院
发明人：	吴民富;李莎;蔡津津;付博;齐明;詹清敏;林立栋
专利状态：	有效
申请日期：	2019-07-12T00:00:00+0800
发布日期：	2019-11-19T00:00:00+0800
申请号：	CN201910627040.1
公开号：	CN110470721A
代理机构：	佛山东平知识产权事务所(普通合伙)
代理人：	龙孟华
分类号：	G01N27/48(2006.01);G;G01;G01N;G01N27
申请人地址：	528100 广东省佛山市三水区乐平镇职教路3号佛山职业技术学院
主权项：	1.一种丙烯酰胺电化学快速检测方法，包括以下步骤： 1)修饰电极的制备，在石墨电极表面加入壳聚糖、羧基化碳纳米管后电化学沉积纳米金颗粒； 2)固定抗体，往修饰电极加入丙烯酰胺多克隆抗体孵育一段时间、用缓冲液冲洗后，使用酪蛋白封闭未结合的活性位点； 3)将待测的丙烯酰胺经巯基丙酸衍生后的产物丙烯酰胺-巯基丙酸滴加到经步骤2)处理后的修饰电极中孵育一段时间，用缓冲液冲洗修饰电极； 4)将经步骤3)处理后的修饰电极与铂电极、Ag/AgCl参比电极组成三电极体系，丙烯酰胺-巯基丙酸会引起体系电流变化，将电流变化值与标准曲线进行对比确定丙烯酰胺-巯基丙酸的浓度，进而确定丙烯酰胺的浓度。 2.根据权利要求1所述的一种丙烯酰胺电化学快速检测方法，其特征在于，所述在石墨电极表面加入壳聚糖、羧基化碳纳米管的步骤如下： 1)碳纳米管羧基化：取多壁碳纳米管在H2SO4：HNO3＝3:1混合溶液中超声一段时间，然后在70±5℃条件下磁力搅拌一段时间；用水反复冲洗至pH值为中性，产物经离心、透析后得到的羧基化碳纳米管，真空干燥； 2)石墨电极经不同粒径的微米级氧化铝、麂皮依次抛光至镜面，然后超声波清洗，氮气吹干； 3)将上述制备的羧基化碳纳米管超声分散到去离子水中，取一定体积的分散好的羧基化碳纳米管，并加入同等体积的、质量浓度为0.2％的壳聚糖；涡旋震荡混匀后，滴加该混合溶液3～5μL到经过预处理的石墨电极表面，烘干即可。 3.根据权利要求1所述的一种丙烯酰胺电化学快速检测方法，其特征在于，所述电化学沉积纳米金颗粒是在氯金酸中进行的，具体为：在5mL、0.5mM的氯金酸水溶液中，采用循环伏安法电沉积金纳米颗粒，扫描电位为-0.3～0.3V，扫描速度为50mV s-1，扫描10段。 4.根据权利要求1所述的一种丙烯酰胺电化学快速检测方法，其特征在于，所述丙烯酰胺多克隆抗体的制备方法如下： 1)抗原的制备： a.半抗原的合成将丙烯酰胺与3-巯基丙酸反应，使丙烯酰胺分子结构上的烯烃与3-巯基丙酸上的巯基发生反应形成间隔臂，从而获得丙烯酰胺半抗原； b.免疫原的制备将丙烯酰胺半抗原与卵清蛋白偶联得到免疫原； 2)抗体的制备将上述制备的免疫原诱导动物产生丙烯酰胺多克隆抗体。 5.根据权利要求1所述的一种丙烯酰胺电化学快速检测方法，其特征在于，所述标准曲线根据预先确定浓度的丙烯酰胺-巯基丙酸溶液、实验确定相应电流变化值后绘制出。 6.根据权利要求1所述的一种丙烯酰胺电化学快速检测方法，其特征在于，在所述步骤2)和所述步骤3)中，孵育条件为：37℃孵育1h。 7.根据权利要求1所述的一种丙烯酰胺电化学快速检测方法，其特征在于，所述缓冲液为0.01M、pH7.4的PBST缓冲液。 8.根据权利要求1所述的一种丙烯酰胺电化学快速检测方法，其特征在于，经步骤2)处理后的修饰电极置于4℃的冰箱中备用。 9.一种丙烯酰胺多克隆抗体的制备方法，其特征在于，包括如下步骤： 1)抗原的制备： a.半抗原的合成将丙烯酰胺与3-巯基丙酸反应，使丙烯酰胺分子结构上的烯烃与3-巯基丙酸上的巯基发生反应形成间隔臂，从而获得丙烯酰胺半抗原； b.免疫原的制备将丙烯酰胺半抗原与卵清蛋白偶联得到免疫原； 2)抗体的制备将上述制备的免疫原诱导动物产生丙烯酰胺多克隆抗体。
所属类别：	发明专利